刀額新對(duì)蝦過(guò)敏原蛋白的提取純化及檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、蝦及其制品以其較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特風(fēng)味，越來(lái)越受到人們的青睞，但由于蝦是極易致敏的食物之一，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康，因此開(kāi)展蝦過(guò)敏原蛋白的相關(guān)研究具有十分重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
　　本研究選用刀額新對(duì)蝦（Metapenaeus ensis）作為研究對(duì)象，應(yīng)用硫酸銨分段鹽析法從蝦蛋白粗提液中初步提取刀額新對(duì)蝦過(guò)敏原蛋白，再用 Sephadex G-100凝膠柱層析對(duì)初提物進(jìn)行純化。結(jié)果顯示：pH6.54，飽和度為40％的硫酸銨分段鹽析

2、沉淀組分經(jīng)Sephadex G-100凝膠柱層析得到單一洗脫峰，經(jīng)SDS-PAGE電泳得到1個(gè)電泳條帶，蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為36.1 kDa。經(jīng)斑點(diǎn)免疫法檢測(cè)該組分顯示具有強(qiáng)烈的過(guò)敏原活性，確定了從蝦提取過(guò)敏原蛋白的工藝參數(shù)。用純化的蝦過(guò)敏原蛋白，對(duì)6-8周齡的雌性Balb/c小鼠短程免疫，間接ELISA法檢測(cè)抗血清效價(jià)及其交叉反應(yīng)性，結(jié)果顯示，該短程免疫法僅用19天便可制得效價(jià)為1:6400的抗血清；該抗血清對(duì)南美白對(duì)蝦、黑斑口蝦姑和

3、中國(guó)明對(duì)蝦的過(guò)敏原無(wú)交叉反應(yīng)性；該抗血清經(jīng)硫酸銨沉淀、DEAE-Cellulose DE-52層析和Sephadex G-150層析分離純化，最終獲得刀額新對(duì)蝦過(guò)敏原的多克隆抗體。用間接ELISA法的原理設(shè)計(jì)刀額新對(duì)蝦過(guò)敏原的檢測(cè)方法，確定了蝦過(guò)敏原的檢測(cè)區(qū)間為0.32μg/mL-16μg/mL。分離純化了刀額新對(duì)蝦過(guò)敏原蛋白，制備了小鼠抗蝦過(guò)敏原蛋白的多克隆抗體，并建立了蝦過(guò)敏原的檢測(cè)方法，為蝦及其制品中致敏物質(zhì)的檢測(cè)技術(shù)提供了可行的