高效毛細(xì)管電泳用于食品及藥品分析的方法探究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis,CE)是一種不斷發(fā)展的分離分析技術(shù)。相比于其他分離方法,具有分離效率高、選擇性好和分析時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。在過(guò)去的幾十年中,CE因其可根據(jù)分析物類別的不同而提供多種不同的分離模式成為各界關(guān)注的焦點(diǎn)?，F(xiàn)在CE已廣泛應(yīng)用于諸多領(lǐng)域,如食品分析、分子生物學(xué)、醫(yī)藥及環(huán)境監(jiān)控等。目前的主要發(fā)展方向是技術(shù)的完善和應(yīng)用研究。
　　本文探索了CE技術(shù)在食品與藥品分析中的應(yīng)用,采用簡(jiǎn)便高效的

2、樣品處理技術(shù)與CE進(jìn)行連用應(yīng)用于食品中相關(guān)組分的檢測(cè)研究,擴(kuò)展了CE在藥品和食品領(lǐng)域中的應(yīng)用。將試驗(yàn)設(shè)計(jì)和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用于CE分離結(jié)果的預(yù)測(cè)。建立了食品和藥品分析的CE方法,并與HPLC法相比對(duì)。
　　第一章綜述部分,對(duì)CE的基本原理和分離模式進(jìn)行了簡(jiǎn)單介紹。綜述了毛細(xì)管電泳技術(shù)在藥物和食品分析領(lǐng)域中的應(yīng)用,闡明了本論文的研究目的與意義。
　　第二章建立了分散液液微萃取(DLLME)–非水毛細(xì)管電泳(NACE)法用于水果和

3、果汁中抑霉唑(IMZ)、咪鮮胺(PZ)和噻苯咪唑(TBZ)的檢測(cè)。NACE背景緩沖液的組成為含有30mmol/L氯化銨和0.5％磷酸的甲醇-乙腈(35:65,v/v)混合溶液。實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品前處理DLLME方法的萃取劑和分散劑類型與用量、樣品溶液pH、鹽含量、萃取方式和萃取時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化。80μL三氯甲烷為萃取劑,0.5mL四氫呋喃為分散劑,樣品溶液pH為6.0,氯化鈉加入量為0.25g,渦旋10s。方法的檢出限范圍為4.67~7.19ng

4、/mL,對(duì)樣品(蘋果、圣女果、葡萄汁)檢測(cè)的回收率為72%~102%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于6.4%。
　　第三章建立了一種快速簡(jiǎn)單的測(cè)定水產(chǎn)品中甲醛的膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法(MEKC)。采用2,4-二硝基苯肼為衍生試劑,甲醛經(jīng)衍生后用所建立的MEKC法進(jìn)行測(cè)定。分離測(cè)定在熔融石英毛細(xì)管(75μmI.D;有效長(zhǎng)度50.5cm)內(nèi)進(jìn)行,分離電壓25kV,溫度25℃,背景緩沖液為pH=9.0的20mmol/L硼砂和20mmol/LS

5、DS混合溶液,30mbar下進(jìn)樣3s。分離在6.5min內(nèi)完成。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為2~100mg/L,線性相關(guān)系數(shù)為0.999。檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別為0.57和1.89μg/mL。樣品經(jīng)水蒸汽蒸餾處理,方法的回收率為83.7%~97.2%。
　　第四章建立了響應(yīng)面優(yōu)化法(RSM)和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(ANN)與毛細(xì)管電泳法相結(jié)合用于復(fù)方呋塞米片中呋塞米(FUR)和鹽酸阿米洛利(AM)的分離測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用Box-Be

6、hnken設(shè)計(jì)優(yōu)化CE分離條件,利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中的徑向基函數(shù)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(RBFNN)預(yù)測(cè)CE最佳分離結(jié)果。獲得最優(yōu)分離條件為16mmol/LNaH2PO4背景緩沖液,pH=7.21,分離電壓24kV,30mbar下進(jìn)樣6s,UV檢測(cè)波長(zhǎng)223nm。AM和FUR的電泳分離在5min內(nèi)完成,檢出限分別為0.31μg/mL和0.66μg/mL。該方法成功應(yīng)用于復(fù)方呋塞米片中AM和FUR的測(cè)定,方法精密度(RSD)小于2.2%,回收率為98.8

7、%~102.5%。該方法與中國(guó)藥典中高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行了比對(duì)。兩種方法的測(cè)定結(jié)果一致,但CE的分析時(shí)間顯著縮短,而且具有試劑消耗量少的優(yōu)點(diǎn)。
　　第五章建立了毛細(xì)管區(qū)帶電泳法(CZE)用于復(fù)方甲苯咪唑片中甲苯咪唑和鹽酸左旋咪唑的分離測(cè)定。分離在60cm(有效長(zhǎng)度50.5cm)×75μmI.D的熔融石英毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行,背景緩沖液為20mmol/L,pH=3.0的NaH2PO4溶液,分離電壓25kV。組分在8min內(nèi)獲得良好

8、的分離;鹽酸左旋咪唑和甲苯咪唑的的檢出限分別為1.43和2.50μg/mL;標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為10~500μg/mL,線性相關(guān)系數(shù)R2大于0.999;平均回收率大于96%。與中國(guó)藥典(2010,II)中HPLC法進(jìn)行了比對(duì),結(jié)果顯示,所建立的CZE法在線性、靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度上與HPLC法相一致,但CZE法的分析時(shí)間縮短,有機(jī)溶劑消耗量降低。證實(shí)了CE法可以作為HPLC法的高效、低成本的良好替代方法。
　　第六章建立了一種非

9、水毛細(xì)管法(NACE)用于復(fù)方甲苯咪唑片中甲苯咪唑和鹽酸左旋咪唑的測(cè)定。最優(yōu)NACE分離條件為:檢測(cè)波長(zhǎng)210nm,含有10mmol/L氯化銨的甲醇-乙腈(40:60,v/v)混合溶液為非水背景緩沖液,分離電壓25kV。鹽酸左旋咪唑和甲苯咪唑的遷移時(shí)間分別為2.67min和3.82min,兩個(gè)組分的線性范圍均為5~200μg/mL,線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999。方法的系統(tǒng)適用性、線性和精密度都獲得了良好的結(jié)果。鹽酸左旋咪唑和甲苯咪唑的檢