高效毛細(xì)管電泳分析乳鐵蛋白的方法研究.pdf

1、本論文分別利用高效毛細(xì)管電泳技術(shù)及高效液相色譜技術(shù)對乳制品中低含量乳鐵蛋白、果醬中痕量納他霉素的測定方法進(jìn)行了研究，本論文分如下4個部分: (1)建立了高效毛細(xì)管電泳在酸性分離體系下測定高含量乳鐵蛋白的新方法。以37cm×100μm i.d毛細(xì)管為分離柱，35mmol/L磷酸和14g/L聚氧化乙烯300000(PEO)(1mo/L CsOH調(diào)pH 2.50)為分離緩沖液，0.05 mol/L磷酸二氫鈉(1mol/L磷酸調(diào)pH 2

2、.20)為樣品緩沖液，檢測波長為214nm。在50～300mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9986，檢出限和定量限分別為10mg/L和50mg/L。由于提取后的樣品必須用水稀釋10倍后才能進(jìn)樣，因此，該法僅適合于乳鐵蛋白片劑及原料等樣品中高含量乳鐵蛋白的測定。 (2)建立了高效毛細(xì)管電泳在堿性分離體系下測定高含量乳鐵蛋白的新方法。以77cm×100μm i.d.毛細(xì)管為分離柱，以0.1m

3、ol/L硼酸，0.01mol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)和8g/L羥乙基纖維素(HEC)(1mol/L CsOH調(diào)pH8.80)為分離緩沖液，以15mmol/L硼酸和20mmol/LSDS為樣品提取介質(zhì)(0.25mol/L LiOH調(diào)pH8.60)，分離電壓30kV，檢測波長214nm。在10～1000mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993，檢出限和定量限分別為3mg/L和10mg/L。由于在

4、目前的分離條件下，不能實(shí)現(xiàn)低含量乳鐵蛋白與乳制品中主要的乳清蛋白的分離，因而該法僅適于乳鐵蛋白片劑及原料等基體簡單的樣品中乳鐵蛋白的測定。 (3)建立了高效毛細(xì)管電泳在堿性分離體系下測定低含量乳鐵蛋白的新方法。以57cm×50μm i.d.毛細(xì)管為分離柱，0.3mol/L硼酸，20mmol/LSDS和8g/L HEC為分離緩沖液(pH=8.80)，以0.05mol/L醋酸為樣品提取介質(zhì)，離心后取上清液直接進(jìn)樣測定。分離溫度25℃

5、，分離電壓20kV，在214nm處對含有乳鐵蛋白的乳制品進(jìn)行檢測。在50～800mg/L范圍內(nèi)，乳鐵蛋白質(zhì)量濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，檢出限和定量限分別為15mg/L和50mg/L。本方法進(jìn)一步拓寬了堿性體系下高效毛細(xì)管電泳測定乳鐵蛋白的適用范圍。適于嬰兒配方奶粉、保健食品中低含量乳鐵蛋白的測定。 (4)建立了高效液相色譜測定果醬中殘留納他霉素的新方法。果醬經(jīng)甲醇-水-冰乙酸(體積比為20:80:10)提取溶劑提取。采用Hyp

6、ersil ODS2C18(200mm×4.0mm i.d.，5.0μm)色譜柱，甲醇-0.75％磷酸水溶液(體積比為75:25)為流動相，流速為1.00mL/min，紫外檢測波長為304nm。在0.5～100mg/kg范圍內(nèi)，納他霉素在果醬中含量與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9999)，加標(biāo)回收率為93.14％～98.24％(n=6)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.72％～1.49％，在番茄醬和草莓醬樣品中其檢出限分別為0.06mg/