高效離心分配色譜分離純化根皮苷及其氧化制備黃色素的研究.pdf

1、根皮苷是根皮素的葡萄糖苷，屬于植物黃酮類中的二氫查爾酮苷，它廣泛存在于多種植物組織中，其中蘋果的樹(shù)枝、葉以及蘋果果實(shí)中提取含量尤其高，曾一度被認(rèn)為是蘋果中的特征性物質(zhì)。
　　 本研究首先建立了一種快速測(cè)定蘋果樹(shù)枝、葉中根皮苷含量的RP-HPLC檢測(cè)方法。色譜條件為Waters Symmetry C18柱(150mm×4.6mm，Φ5μm)，流動(dòng)相為甲醇和pH為2.6的磷酸水溶液(50:50)，等度洗脫，柱溫為30℃，287nm紫

2、外檢測(cè)，流速為0.6mL.min-1，在10min內(nèi)可實(shí)現(xiàn)蘋果樹(shù)枝、葉中根皮苷的快速分離。分析結(jié)果表明：根皮苷在0.30～4.50μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993，加標(biāo)回收率98.95％，RSD為1.22％，說(shuō)明該方法準(zhǔn)確可靠。
　　 然后以蘋果樹(shù)枝為原料，使用乙醇溶劑從中提取根皮昔，并采用HPLC法測(cè)定提取液中根皮苷的含量。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行工藝參數(shù)優(yōu)化。結(jié)果表明，對(duì)蘋果樹(shù)枝中根皮

3、苷提取效果影響的大小順序?yàn)椋阂毫媳?、提取溫度、乙醇濃度、提取時(shí)間：其最佳提取工藝為：液料比20mL/g，提取溫度70℃，乙醇濃度為60％，提取時(shí)間為90min。在此優(yōu)化工藝條件下，根皮苷的提取含量為39.2mg/g。
　　 為了獲得高純度的根皮苷，運(yùn)用高效離心分配色譜技術(shù)對(duì)蘋果樹(shù)枝乙醇提取物中的根皮苷進(jìn)行分離純化。通過(guò)對(duì)兩相溶劑體系、轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速和流動(dòng)相流速等參數(shù)進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，得到了滿意的分離效果。結(jié)果表明：最佳兩相溶劑系統(tǒng)為

4、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1：5：1：5，v/v)，上相有機(jī)相為固定相，下相水相為流動(dòng)相，轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速為1500rpm，流速為3.0mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為287nm。在此條件下，在30min內(nèi)，從純度為17.91％蘋果樹(shù)枝乙醇提取物中一步分離純化得到根皮苷，高效液相色譜法測(cè)定其純度為91.20％，根皮苷的回收率為98.10％。
　　 采用多酚氧化酶(PPO)對(duì)根皮苷進(jìn)行酶法合成根皮苷氧化產(chǎn)物(POP)，氧化動(dòng)力學(xué)顯示，在40