類朊蛋白Shadoo缺失影響小鼠神經(jīng)行為學(xué)的研究.pdf

1、朊病毒疾病是一類神經(jīng)退行性疾病,曾經(jīng)肆虐英國的“瘋牛病”即是朊病毒疾病中的一種,有研究稱食用感染瘋牛病的牛肉可能導(dǎo)致人類患上朊病毒疾病,從而引發(fā)了與朊病毒疾病和食品安全性相關(guān)的研究熱潮,朊病毒疾病的研究對(duì)于食品安全領(lǐng)域具有重大的意義。目前公認(rèn)正常型朊蛋白(PrPC)轉(zhuǎn)變?yōu)轲W型朊蛋白(PrPSC)并在腦中沉積是朊病毒疾病發(fā)病的主要原因,但具體的發(fā)病機(jī)理尚不清楚。當(dāng)前,科學(xué)家認(rèn)為可能存在未知蛋白“X”在PrPC到PrPSC的轉(zhuǎn)變中起到?jīng)Q定

2、性作用。Shadoo蛋白是朊蛋白家族的最新成員,與PrPC蛋白具有相同的高度保守疏水區(qū)域,二者主要表達(dá)位置都在神經(jīng)系統(tǒng),而且在神經(jīng)系統(tǒng)中具有重疊的神經(jīng)保護(hù)功能,因此推測(cè)Shadoo蛋白是蛋白“X”的候選者。
　　行為是動(dòng)物對(duì)于外界環(huán)境或刺激的反應(yīng),由神經(jīng)系統(tǒng)控制。動(dòng)物正常的行為是其神經(jīng)系統(tǒng)功能完整性的一種表現(xiàn),任何行為的異常都可以反映神經(jīng)系統(tǒng)功能的狀況。通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn),可以研究蛋白的功能,評(píng)估動(dòng)物的神經(jīng)狀態(tài)以及分析動(dòng)物的心理。本文

3、主要研究Shadoo蛋白的缺失對(duì)于小鼠行為的影響,分析Shadoo蛋白缺失對(duì)于其他蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)而找到可能影響小鼠神經(jīng)行為學(xué)發(fā)生改變的蛋白。
　　本研究主要分為三個(gè)部分:首先通過Sprn敲除小鼠的行為學(xué)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)Sprn敲除小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶和運(yùn)動(dòng)能力提升,但在神經(jīng)興奮狀態(tài)上不如野生型小鼠活躍;在探索能力和關(guān)聯(lián)性記憶方面與野生型小鼠差異不顯著。然后利用PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)對(duì)于Sprn敲除小鼠進(jìn)行了鑒定,發(fā)現(xiàn)所使用的小鼠

4、均為Sprn敲除純合子;通過Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在Sprn敲除小鼠的大小腦中均無Shadoo蛋白表達(dá),但是發(fā)現(xiàn)在Sprn敲除小鼠大腦中PrPC蛋白的表達(dá)量下降,而在其小腦中PrPC蛋白表達(dá)水平上調(diào)。使用免疫組織化學(xué)的方法進(jìn)一步證明了Sprn敲除小鼠大小腦中并無Shadoo蛋白表達(dá),同時(shí)發(fā)現(xiàn)Shadoo蛋白主要在大腦海馬區(qū)和小腦蒲肯野細(xì)胞中表達(dá)。最后從雙向電泳實(shí)驗(yàn)分析出共計(jì)24種表達(dá)量差異在兩倍以上的蛋白點(diǎn),其中3種蛋白表達(dá)上