以大腸桿菌或家蠶絲腺為基礎的無細胞系統(tǒng)的構建.pdf

1、伴隨著大量生物遺傳信息的被人類解讀出來，一種可以快速、高通量合成蛋白質的方法成為了一種迫切的需求。無細胞蛋白質合成系統(tǒng)由于蛋白質合成能力強、操作快速簡單、適于高通量表達各種蛋白質受到廣泛關注。本論文研究的目的就是通過優(yōu)化大腸桿菌無細胞抽提物的制備方法降低無細胞系統(tǒng)的制備成本，提高蛋白質合成能力，為無細胞系統(tǒng)的廣泛應用打下基礎；同時，嘗試利用家蠶絲腺構建的新的無細胞蛋白質合成系統(tǒng)，拓展制備無細胞抽提物的細胞來源，并在真核蛋白質的體外合成方

2、面有廣闊前景。
　　 本論文選擇eGFP作為報告基因，利用pIVEX2.4c作為大腸桿菌無細胞蛋白質合成系統(tǒng)的表達模板構建表達質粒pIVEX2.4c-eGFP。選擇E.coli BL21(DE3)作為制備無細胞抽提物的菌種，測定其生長曲線，確定細胞生長的對數(shù)生長期。優(yōu)化大腸桿菌無細胞抽提物的制備流程，簡化操作步驟和成本，提高蛋白質合成能力，eGFP表達量可以達到427μg/mL。這是國內首次報道通過改進抽提物制備方法構建高效的大