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文檔簡介
1、手性環(huán)氧化物及其水解產(chǎn)物鄰二醇是合成許多生物活性物質(zhì)和手性目標產(chǎn)物的高價值中間體。
本實驗以鄰甲氧基苯基縮水甘油醚為唯一碳源進行多輪富集,從土壤中獲得380多株能利用該環(huán)氧化物的微生物。之后用TLC法定性篩選出25株具有環(huán)氧化物水解酶活性的菌株,之后再通過HPLC法篩選出5株具有立體選擇性的菌株,從中選取最好的一個菌株進行下一步研究并進行菌株鑒定,經(jīng)過形態(tài)觀察及ITS基因序列分析,確定該菌株為Botryosphaeria
2、dothidea,編號為ZJUZQ007。
以單因素方法,對發(fā)酵培養(yǎng)基的配方及發(fā)酵條件進行了優(yōu)化,考察了不同的碳源、氮源、金屬離子及濃度、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值、菌體培養(yǎng)溫度以及底物誘導對菌株的生長及酶活的影響。最終確立了菌株Botryosphaeria d.ZJUZQ007的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方:以2%乳糖為碳源,2%玉米粉為氮源,金屬離子為2mmol/L的Fe2+,1%的NaCl,最適培養(yǎng)條件為30℃,最適pH在4.0-7
3、.0之間,發(fā)酵時間為72h,該酶為非誘導型酶,無需加入底物做誘導劑。
對Botryosphaeria d.環(huán)氧化物水解酶拆分鄰甲氧基苯醚(EMPP)、鄰甲基苯醚(o-GMPE)、間甲基苯醚(m-GMPE)、對甲基苯醚(p-GMPE)四種環(huán)氧化物的反應條件進行了優(yōu)化。確定了最佳反應溫度為30℃,最適緩沖液pH為7.6及最適反應時間為40min,在此反應條件下,(R)-EMPP的e.e.s和E值分別達到了99.9%和50.4,
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