小鼠胚胎共培養(yǎng)：體細(xì)胞狀態(tài)影響及作用機(jī)理.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文小鼠胚胎共培養(yǎng)：體細(xì)胞狀態(tài)影響及作用機(jī)理姓名：譚秀文申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：譚景和20040524山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩_|研究生論立(2004)中文摘要在一些簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基中，受精卵往往發(fā)生“發(fā)育阻斷”。盡管近年來在幾種動(dòng)物(如小鼠和牛)用成份明確的培養(yǎng)基已經(jīng)能夠使胚胎克服體外阻斷而發(fā)育到囊胚，但許多動(dòng)物的胚胎在體外還必須依靠共培養(yǎng)才能發(fā)育到囊胚期。另外，胚胎與體細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)于了解體細(xì)胞與胚胎的相互作

2、用也十分重要。因此，有必要深入研究共培養(yǎng)的影響因素和作用機(jī)理。本實(shí)驗(yàn)首先把昆明白小鼠原核胚分別與小鼠、山羊和雞的輸卵管上皮細(xì)胞(OEC)、大鼠肝細(xì)胞(BRL)和非洲綠猴腎細(xì)胞(VERO)共培養(yǎng)，確定異種體細(xì)胞、細(xì)胞貼滿程度和傳代次數(shù)對(duì)小鼠胚胎發(fā)育的影響：接著，分別用流式細(xì)胞計(jì)量?jī)x和Annexin標(biāo)記檢測(cè)不同貼滿程度和傳代次數(shù)山羊OEC的細(xì)胞周期和凋亡程度，確定體細(xì)胞的生理狀念與胚胎發(fā)育的關(guān)系；最后，通過使用不同的條件化培養(yǎng)液和加隔離膜共

3、培養(yǎng)，以及用高效液相色譜分析條件培養(yǎng)液中的HX濃度的方法探討了體細(xì)胞與共培養(yǎng)胚胎相互作用的機(jī)理。結(jié)果表明：I、小鼠胚胎與原代貼滿ld的小鼠、山羊和雞OEC共培養(yǎng)，發(fā)育到囊胚的比例(分別為617％、572％和562％)差異不顯著。說明體細(xì)胞的種屬差異不影響共培養(yǎng)胚胎的發(fā)育效果。2、小鼠胚胎與半貼滿、貼滿1d、3d和5d的山羊、小鼠和雞原代OEC共培養(yǎng)，與貼滿1d的OEC共培養(yǎng)的胚胎的囊胚發(fā)育率顯著高于其它組。說明體細(xì)胞的貼壁程度影響共培養(yǎng)

4、胚胎的發(fā)育效果。3、小鼠胚胎與原代、II代_千DIII代貼滿1d的雞OEC，原代、III代和V代貼滿1d的山羊和小鼠OEC共培養(yǎng)，與雞原代OEC、山羊和小鼠的原代和III代OEC共培養(yǎng)的胚胎的囊胚發(fā)育率(分別為511％；543％、572％；571％和524％)較高。說明體細(xì)胞的傳代次數(shù)影響共培養(yǎng)胚胎的發(fā)育效果。4、貼滿不同天數(shù)山羊原代OEC和不同傳代次數(shù)貼滿ld山羊OEC的細(xì)胞周期的檢測(cè)顯示，S期細(xì)胞的比率隨貼滿時(shí)間的延長(zhǎng)和傳代次數(shù)的增