锝標記血管細胞粘附分子-1單鏈抗體的制備及其在腫瘤和炎癥顯像中的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述:
　　第一部分：99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv的制備和其在荷瘤鼠SPECT顯像中的初步實驗研究
　　目的：制備并鑒定99mTc標記VCAM-1單鏈抗體，用于小鼠腫瘤模型的顯像，探討作為腫瘤顯像劑的可行性。
　　方法：（1）99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv制備和鑒定：首先將HYNIC與VCAM-1蛋白在酸性環(huán)境下反應2h；再將產(chǎn)物過濾后在還原劑條件下與新鮮99

2、mTcO4-淋洗液反應30min。取少量反應產(chǎn)物做放射薄層層析測量標記率；使用PD-10柱子進行純化，并用放射薄層層析法測量放化純。（2）培養(yǎng)VCAM-1表達不同的三種腫瘤細胞（786-O、SK-OV-3和HT-1080），使用Western Blot和免疫組化檢測三種細胞VCAM-1的表達。（3）細胞實驗：三種細胞的細胞攝取實驗和細胞流出實驗。（4）99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv在正常小鼠和腫瘤模型裸鼠中的生物分布和S

3、PECT顯像：建立786-O、SK-OV-3和HT-1080細胞荷瘤鼠模型，未接種腫瘤的BALB/c-nu裸鼠和荷瘤鼠尾靜脈注射藥物后2h和4h，測量其在體內(nèi)各組織器官（包括血液、大腦、心臟、肺、肝臟、腎、脾、胃、腸、骨骼、肌肉、卵巢）及腫瘤中的％ID/g。觀察99mTc-HYNIC-VCAM-1-scF在鼠腫瘤模型的SPECT顯像情況，然后進行對比。
　　結(jié)果：（1）99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv的標記率為78.

4、79%±5.70%（n=5），放化純?yōu)?2.17±3.32%（n=5）。（2）Western Blot結(jié)果顯示VCAM-1在HT-1080細胞和SK-OV-3細胞中表達較高，而在786-O細胞中表達較低。免疫組化結(jié)果顯示VCAM-1在HT-1080細胞中表達最高、SK-OV-3細胞中表達中等，而在786-O細胞中表達較低。（3）三種細胞對99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv攝取在2h內(nèi)增加較快（相鄰兩個時間點比較，P<0.05

5、），超過2h攝取率增加緩慢（相鄰兩個時間點比較，P>0.05）；786-O、SK-OV-3和 HT-1080三種細胞兩小時細胞攝取率分別為3.54%、5.04%及8.5%。細胞流出實驗顯示在孵育后2h內(nèi)有較多的99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv從786-O、SK-OV-3及HT-1080細胞中流出，孵育2h后99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv在786-O、SK-OV-3及HT-1080細胞中保持在一個穩(wěn)定的水平。

6、（4）99mTc- VCAM-1-scFv在裸鼠體內(nèi)血液清除率較快，肝臟及腎臟攝取率高提示9mTc-VCAM-1-scFv主要通過肝臟及腎臟代謝。（5）SPECT顯像：99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv注射后2h，HT-1080荷瘤鼠可以看到腫瘤組織較明顯顯影（T/B比值為1.66±0.14），注射后4h，HT-1080荷瘤鼠可以看到腫瘤組織顯影進一步清晰（T/B比值為1.77±0.25）；注射后2h，SK-OV-3荷瘤鼠可

7、以看到腫瘤組織的大致顯影（T/B比值為1.31±0.17），4h時，SK-OV-3荷瘤鼠可以看到腫瘤組織顯影較2h明顯（T/B比值為1.35±0.2）；而786-O荷瘤鼠在注射后2h未能看見腫瘤組織的顯像（T/B比值為1.01±0.19），4h仍未見腫瘤組織顯影（T/B比值為1.15±0.20）。
　　結(jié)論：99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv制備過程條件簡單，反應溫和，產(chǎn)率穩(wěn)定。標記產(chǎn)物標記率和放化純較高。細胞實驗、生

8、物分布及SPECT顯像都顯示有潛力成為一種新型腫瘤顯像劑。
　　第二部分：99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv在小鼠炎癥模型SPECT顯像中的初步探討
　　目的：建立小鼠炎癥模型，探討99mTc-VCAM-1單鏈抗體用于炎癥SPECT顯像的可行性。
　　方法：（1）制備小鼠炎癥模型：從小鼠右后肢肌肉注射0.1mL松節(jié)油。（2）99mTc-VCAM-1-scFv在正常鼠和炎癥模型鼠的 SPECT顯像：小鼠尾靜脈

9、注射99mTc-VCAM-1-scFv，對炎癥模型鼠和正常C57小鼠行SPECT顯像，觀察其顯像劑分布。（3）99mTc-VCAM-1-scFv在正常鼠和炎癥模型鼠的生物分布：在炎癥模型鼠和健康裸鼠注入顯像劑后，分別于0.5h、1h、2h和4h測量其在體內(nèi)各組織器官（包括血液、大腦、心臟、肺、肝臟、腎、脾、胃、大腸、小腸、左后肢肌肉、右后肢肌肉、骨骼）中的%ID/g。
　　結(jié)果：（1）C57小鼠炎癥模型容易建立，且所需時間短。（2

10、）生物分布實驗：C57血液清除率較慢，0.5h時為6.67±2.25%（n=4），2h時為5.56±1.12%（n=4），直到4h才降為3.96±1.46%（n=4）。肝臟、脾臟和腎臟攝取較高，其攝取率分別為11.48±1.4、23.04±3.86和32.13±16.8，99mTc-HYNIC-VCAM-1-scFv可能大部分通過肝臟和腎臟代謝。炎癥模型小鼠右下肢和左下肢2h肌肉攝取率分別為1.32±0.63%和0.35±0.07%，P

11、<0.05;而右下肢和左下肢4h只有肌肉攝取率分別為0.84±0.15%和0.19±0.08%，P<0.05。（3）SPECT顯像可以清楚看到小鼠右下肢顯像劑濃聚較左下肢明顯，右下肢炎癥部位的顯像劑的濃聚在4h時達到最高，造模側(cè)1h、2h、4h和6h T/B的比值依次為1.44±0.20、1.57±0.16、1.77±0.23及1.46±0.06。造模小鼠右下肢顯像劑分布在一周時間內(nèi)逐漸增加，至兩周時只有輕微顯影。
　　結(jié)論：應用