粘附分子LSECtin負(fù)調(diào)控T細(xì)胞及其在肝臟損傷中的功能研究.pdf

1、LSECtin是本實(shí)驗(yàn)室率先發(fā)現(xiàn)的一種新的C型凝集素，該家族成員CD23、DC-SIGN、L-SIGN均以粘附分子對(duì)的形式，結(jié)合各種不同的免疫細(xì)胞，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的功能。LSECtin能夠結(jié)合活化的T細(xì)胞，組織芯片結(jié)果顯示LSECtin特異表達(dá)在肝臟，是位于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和Kupffer細(xì)胞表面的膜分子。LSECtin可能在肝臟免疫中發(fā)揮著重要的功能。 為了明確LSECtin粘附活化T細(xì)胞的分子機(jī)制，通過Farwester

2、n-blot、生物質(zhì)譜鑒定和IP實(shí)驗(yàn)確定CD44是LSECtin在活化T細(xì)胞表面上的配體分子，利用ELISA實(shí)驗(yàn)證明兩者之間直接的相互作用。細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)表明，LSECtin的CRD結(jié)構(gòu)域和CD44分子的N-糖基化參與了LSECtin/CD44分子對(duì)之間的相互識(shí)別。以上結(jié)果顯示，LSECtin/CD44分子對(duì)是介導(dǎo)LSECtin粘附活化T細(xì)胞的分子基礎(chǔ)，是一對(duì)新的肝臟/活化T細(xì)胞粘附分子對(duì)。 利用Brdu摻入活化的T細(xì)胞，加入LS

3、ECtin蛋白后，T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少。通過CD25和Annexin V雙標(biāo)的方式，發(fā)現(xiàn)LSECtin能夠誘導(dǎo)活化的T淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡。同時(shí)，減少活化T淋巴細(xì)胞IL-2，IFN-γ的分泌。體外實(shí)驗(yàn)表明，LSECtin可以作為一種T細(xì)胞的負(fù)調(diào)控分子參與抑制免疫反應(yīng)。 利用轉(zhuǎn)基因干涉技術(shù)和在體干涉技術(shù)，構(gòu)建了能夠有效敲低LSECtin在體內(nèi)表達(dá)的小鼠模型，以研究LSECtin在肝臟免疫中的功能。利用尾靜脈注射ConA，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生T細(xì)

4、胞異常活化導(dǎo)致的肝損傷。同野生型小鼠相比，LSECtin表達(dá)敲低的小鼠肝損傷明顯加重，反映T細(xì)胞活性的細(xì)胞因子表達(dá)量顯著上升。表明LSECtin表達(dá)敲低的小鼠由于負(fù)調(diào)控活化T細(xì)胞能力的下降，導(dǎo)致肝臟損傷的加重，利用表達(dá)載體和重組蛋白人為的補(bǔ)充LSECtin，在小鼠體內(nèi)能夠緩解由ConA造成的肝損傷。顯示LSECtin在體內(nèi)同樣能夠發(fā)揮T細(xì)胞負(fù)調(diào)控分子的功能。 綜上，粘附分子LSECtin通過CD44結(jié)合活化的T細(xì)胞，參與了肝臟對(duì)