S-211枯草芽孢桿菌固態(tài)發(fā)酵羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶的研究.pdf

1、以產(chǎn)胞外木聚糖酶的實(shí)驗(yàn)室保藏菌種枯草芽孢桿菌S-211為研究對(duì)象，分別從培養(yǎng)基組分、無(wú)機(jī)鹽離子、接種量、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度及初始pH等單因素出發(fā)，研究了這些因素對(duì)枯草芽孢桿菌S-211固態(tài)發(fā)酵羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶的影響，并對(duì)影響因素進(jìn)行了正交優(yōu)化。其研究結(jié)果表明：適宜于枯草芽孢桿菌S-211固態(tài)發(fā)酵的最佳培養(yǎng)基配方為：(在100mL三角瓶中加入10g培養(yǎng)基)羊胃容物：玉米粉：豆餅粉：麩皮=50：12：19：19、Mn2+0.6g/L、Na

2、+7g/L、Mg2+5g/L、K+14g/L、Fe2+0.3g/L、Ca2+6g/L、Zn2+0.5g/L。發(fā)酵培養(yǎng)基配方確定后，通過(guò)對(duì)初始pH值、接種量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間等發(fā)酵條件的摸索，確定最佳發(fā)酵工藝條件為：初始pH7.0、接種量4mL（即在每100mL三角瓶中接入4mL濃度為107cfu/mL的孢子懸液）、發(fā)酵溫度30℃、發(fā)酵時(shí)間36h，經(jīng)優(yōu)化后的枯草芽孢桿菌S-211固態(tài)發(fā)酵50％羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶酶活達(dá)到了1219.63U

3、/mL，較原始基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基在常規(guī)培養(yǎng)條件下的酶活676.21U/mL提高了1.8倍，為放大枯草芽孢桿菌S-211固態(tài)發(fā)酵羊胃容物產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵工藝條件提供了可靠的理論依據(jù)。
　　按優(yōu)化后的條件對(duì)枯草芽孢桿菌 S-211進(jìn)行產(chǎn)酶培養(yǎng)，得到粗酶液。發(fā)酵液經(jīng)20%-80%硫酸銨分級(jí)沉淀、透析袋濃縮、Sephadex-G25脫鹽、Sephadex-G100凝膠層析分離純化后，得到一個(gè)電泳純的木聚糖酶，酶純化倍數(shù)為5.28，回收率為30

4、.98%，比活達(dá)14.58IU/mg。該酶經(jīng) SDS-PAGE顯示為單一電泳帶，分子量為37.8KDa。
　　對(duì)枯草芽孢桿菌 S-211木聚糖酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)測(cè)定，結(jié)果表明該酶最適反應(yīng)溫度為55℃，在25℃-50℃具有較好的穩(wěn)定性；最適反應(yīng)pH值為pH6.0，在pH4.0-pH8.6具有較好的穩(wěn)定性；Pb2+、Fe3+、Hg2+對(duì)酶有抑制作用，Mg2+、Zn2+、Fe2+、K+對(duì)酶有一定的激活作用；在55℃，pH6.0條件下，該酶對(duì)