誘變和原生質(zhì)體融合聯(lián)用選育谷胱甘肽高產(chǎn)酵母菌株.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文誘變和原生質(zhì)體融合聯(lián)用選育谷胱甘肽高產(chǎn)酵母菌株姓名：賈學(xué)杰申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：王雅琴20050610北京化工大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文經(jīng)過篩選、鑒定得到兼有雙親優(yōu)良性狀的融合子R1。其生物量為989甩，谷胱甘肽含量為212mg／g，谷胱甘肽產(chǎn)量為2085mg／L。谷胱甘肽產(chǎn)量比兩親株分別提高了1294％和1555％。在搖瓶中對融合子R1的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化。通過對融合子Rl培養(yǎng)條件的考察

2、得到較優(yōu)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度32。C，培養(yǎng)基初始PH為70，接種量為10％，250ml搖瓶裝液量為30ml，培養(yǎng)時間33h。研究了不同碳源、氮源和磷酸鹽對融合子Rl發(fā)酵生產(chǎn)GSH的影響，確定合適的碳源為工業(yè)葡萄糖，有機(jī)氮源為酵母粉，無機(jī)氮源為N／hCI，磷酸鹽為KH2P04和K2HP04“3H20。正交實(shí)驗(yàn)確定最佳濃度為酵母粉109／L，葡萄糖309／L，NH4C139／L，K2HP04“3H2015g／L，KH2P0420g／L；考察了

3、不同的無機(jī)鹽的影響，確定在培養(yǎng)基里添加019／L的MgS04“7H20、FeS04和KCl。優(yōu)化后Rl的谷胱甘肽產(chǎn)量為2542mg／L，比優(yōu)化前提高了219％。比較了不同種類的氨基酸對融合子R1積累GSH的影響，半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、蛋氨酸都能夠提高GSH含量但對細(xì)胞的生長促進(jìn)作用不明顯甚至有不同程度的抑制。其中半胱氨酸的效果最明顯，實(shí)驗(yàn)考察了半胱氨基酸的添加量和添加方式的影響。確定半胱氨酸的添加量為3mmol／L，此時R1的谷胱甘

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