紫外誘變克魯維酵母原生質(zhì)體選育發(fā)酵乳清高產(chǎn)酒精菌株.pdf

1、該論文研究了菌齡、酶解溫度、酶解時間、酶濃度四介單因素對馬克斯克魯維酵母原生質(zhì)體形成率和再生率的影響,采用菌齡、酶解溫度、酶解時間、酶濃度、穩(wěn)滲劑進行五因素四水平的正交試驗,分析各因素的極差值,評價各因素的影響程度,結(jié)果表明:酶濃度的極差值最高,其次為酶解時間,然后依次為菌齡、穩(wěn)滲劑、酶解溫度,酶濃度為影響原生質(zhì)體形成的主要因素,原生質(zhì)體形成和再生的最佳條件是:菌齡為12h、酶濃度為1.5％、酶解時間為1h、酶解溫度為28℃、穩(wěn)滲劑為K

2、Cl,在此條件下,原生質(zhì)體形成率為92.3%,再生率為29.6%.研究了馬克斯克魯維酵母原生質(zhì)體紫外線照射劑量和致死率的關(guān)系,得到了紫外線對原生質(zhì)體的致死率曲線,當紫外線照射劑量為:紫外燈功率20W,照射距離30cm,照射時間為50s時,原生質(zhì)體的致死率為80.2%,因此,選擇該劑量為馬克斯克魯維酵母原生質(zhì)體紫外線誘變的適宜劑量.紫外線誘變馬克斯克魯維酵母原生質(zhì)體后,采用TTC雙層平板法進行一級篩選,通過比較各菌株的顏色深淺來衡量其產(chǎn)酒

3、精能力的強弱,從平扳上篩選出了顏色較深的24株菌進行二級篩選.以乳清為培養(yǎng)基采用杜氏小管發(fā)酵法進行二級篩選,發(fā)酵時間為48h,以產(chǎn)氣速度和杜氏管產(chǎn)氣量為指標,從中選出產(chǎn)氣速度較快和產(chǎn)氣量較大的8株菌進行三級篩選.用300ml搖瓶發(fā)酵法,對二級篩選得到的8株乳酒酵母進行三級篩選,測定其酒精產(chǎn)率和殘?zhí)橇?從中篩選出一株酒精產(chǎn)率較高且發(fā)酵速度較快的菌株,其96h發(fā)酵乳清酒精產(chǎn)率為3.8%,殘?zhí)橇繛?.1%,而出發(fā)菌株酒精產(chǎn)率為2.5%,殘?zhí)橇?/p>

4、為2.7%,誘變后的菌株較出發(fā)菌株酒精產(chǎn)率提高52%,該菌株定名為ZR-20.采用連續(xù)傳代的方法研究了ZR-20菌株的遺傳穩(wěn)定性,結(jié)果表明:連續(xù)傳代10次后,ZR-20菌株發(fā)酵性能與初代菌株相比無明顯變化.對ZR-20菌株的生長和發(fā)酵特性進行了研究,分別測定了ZR-20菌株生長和發(fā)酵的最適溫度、pH.結(jié)果表明:ZR-20菌株的最適生長溫度為34℃、生長的最適pH為4.9,最適發(fā)酵溫度為28℃,發(fā)酵的最適pH為4.9;研究了不同溫度、pH

5、、接種量對生長曲線和發(fā)酵曲線的影響.結(jié)果表明:接種量對生長曲線影響很明顯,接種量越大,達到穩(wěn)定期的時間越短.但是最終生物量并不受接種量的影響.在不同pH渣下,生長有一定的差異,但是并不明顯,在pH為5.9時達到穩(wěn)定期所用時間最短;對于發(fā)酵曲線,接種量對發(fā)酵力影響不明顯.在pH3.9-5.9范圍內(nèi),pH值對發(fā)酵曲線的影響亦不明顯.采用發(fā)酵溫度、pH、接種量進行三因素三水平的正交試驗對發(fā)酵條件進行優(yōu)比,結(jié)果表明:ZR-20菌株發(fā)酵乳清的最佳