熒光核酸探針檢測(cè)Pb2+方法研究.pdf

1、隨著金屬制品、汽油、蓄電池、化學(xué)涂料等產(chǎn)品使用量的不斷增加以及工農(nóng)業(yè)三廢的排放,鉛以多種途徑廣泛進(jìn)入到人們的生活環(huán)境中,并呈加劇趨勢(shì),不僅直接影響農(nóng)作物的生長(zhǎng)發(fā)育、產(chǎn)量、品質(zhì)等,而且間接通過(guò)食物鏈對(duì)人體健康造成嚴(yán)重的危害,鉛污染已經(jīng)引起了廣泛關(guān)注。傳統(tǒng)的重金屬鉛檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)難以滿(mǎn)足環(huán)境與食品安全監(jiān)控的需求,因此,建立方便、快速的重金屬鉛的檢測(cè)技術(shù)十分必要。
　　本研究以DNAzyme與金屬離子間的特異性為研究思路,以近年來(lái)新發(fā)展起

2、來(lái)的FRET為監(jiān)測(cè)手段,設(shè)計(jì)一種以DNAzyme為母體可以檢測(cè)重金屬Pb2+的熒光核酸探針,將核酸分析法結(jié)合發(fā)光方法,用于重金屬Pb2+的檢測(cè),為加強(qiáng)我國(guó)環(huán)境和食品安全控制和監(jiān)督提供技術(shù)支持。在實(shí)驗(yàn)中,首先,將8-17 DNAzyme增加了兩個(gè)“G-C”堿基對(duì)進(jìn)行增強(qiáng)熱穩(wěn)定性的結(jié)構(gòu)修飾,并標(biāo)記上一個(gè)熒光基團(tuán)“FAM”和兩個(gè)熒光淬滅基團(tuán)“Dabcyl”,設(shè)計(jì)成雙淬滅Pb2+熒光核酸探針P1;在探針P1的基礎(chǔ)上去掉底物鏈上的一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)

3、“Dabcyl”,設(shè)計(jì)成單淬滅Pb2+熒光核酸探針P2;在探針P2的基礎(chǔ)上去掉增加的兩個(gè)“G-C”堿基對(duì),設(shè)計(jì)成單淬滅Pb2+熒光核酸探針P3。并根據(jù)實(shí)際情況,采用溫度梯度法對(duì)三種核酸探針的熱穩(wěn)定性加以比較,探針P1的熱穩(wěn)定性最好,選取P1作為深入研究的材料。隨后研究了探針P1對(duì)Cd2+、Zn2+、Mg2+、Cu2+、Mn2+、Pb2+6種二價(jià)金屬離子的響應(yīng),結(jié)果表明探針P1對(duì)Pb2+具有很強(qiáng)的特異性,在探針濃度為2.5×10-7mol