應(yīng)用核酸探針對汞離子的檢測.pdf

1、汞是一種重要的金屬元素同時也是一種重要的環(huán)境污染物，因此，發(fā)展一種高靈敏高選擇性的用于環(huán)境及食品中汞離子的檢測方法具有非常重要的意義?；诖?，在本論文的研究中，我們發(fā)展了以下兩種基于核酸探針的汞離子和生物巰基的檢測方法:
　　基于DNA三叉結(jié)構(gòu)的熒光探針特異性檢測Hg2+濃度和生物巰基濃度的方法，DNA三叉結(jié)構(gòu)由三條單鏈DNA組成，SS和QS分別在5'端標(biāo)記了HEX和3'端標(biāo)記了BHQ1，AS不作任何標(biāo)記，其中SS和AS單鏈DNA

2、富含胸腺嘧啶T。當(dāng)沒有Hg2+時，三條單鏈DNA能形成DNA三叉結(jié)構(gòu)，當(dāng)Hg2+存在時，Hg2+能夠介導(dǎo)SS和AS單鏈DNA中的胸腺嘧啶形成T-Hg2+-T結(jié)構(gòu)，將第QS單鏈DNA從DNA三叉結(jié)構(gòu)中“推離”出去，DNA三叉結(jié)構(gòu)變?yōu)殡p鏈DNA，使標(biāo)記了熒光基團HEX和猝滅基團BHQ1的兩條DNA分開，BHQ1對HEX熒光的猝滅被解除，HEX熒光值增加。該檢測方法對汞離子的靈敏，最低檢測限度為3nM。DNA三叉結(jié)構(gòu)生物傳感器還可以用來檢測谷

3、胱甘肽和半胱氨酸等含有巰基的化合物，檢測范圍為20 nM-400 nM。該檢測方法準(zhǔn)確，檢測范圍較寬，特異性強，方法簡單快捷，易操作。
　　基于T-Hg2+-T結(jié)構(gòu)和G四聚體的簡便方法檢測Hg2+濃度，設(shè)計兩段DNA序列，其中一段序列是一段富含G，能形成G四聚體的序列HT-DNA，另一段是富含T的能對汞離子有特異性響應(yīng)的序列RHT-DNA。在沒有汞離子的條件下，HT-DNA能在相應(yīng)的緩沖液條件下自由地發(fā)生折疊，形成G四聚體，與RH

4、T-DNA不滿足堿基互補配對原則，無法配對，而加入汞離子后，T堿基能通過汞離子形成T-Hg2+-T的錯配，使得HT-DNA和RHT-DNA通過配對形成雙鏈DNA，從而導(dǎo)致HT-DNA無法通過自由折疊形成G四聚體。
　　此傳感器基于G四聚體的特性，可以通過熒光分光光度計和紫外分光光度計兩種途徑檢測Hg2+濃度，熒光分析法對Hg2+檢測的最低檢測限度為17.2nM，紫外分析法對Hg2+檢測的最低檢測限度為15nM，此方法無需對DNA進