核酸探針技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用

1、1科目：食品生物技術(shù)導(dǎo)論學(xué)院：化學(xué)生物與材料科學(xué)學(xué)院專業(yè)：生物技術(shù)班級(jí)：090551學(xué)號(hào)：09055106姓名：黃菁3核酸探針技術(shù)原理是堿基配對(duì)?；パa(bǔ)的兩條核酸單鏈通過退火形成雙鏈，這一過程稱為核酸雜交。核酸探針是指帶有標(biāo)記物的已知序列的核酸片段，它能和與其互補(bǔ)的核酸序列雜交，形成雙鏈，所以可用于待測核酸樣品中特定基因序列的檢測。每一種病原體都具有獨(dú)特的核酸片段，通過分離和標(biāo)記這些片段就可制備出探針，用于疾病的診斷等研究。(一)核酸探針

2、的種類1.按來源及性質(zhì)劃分可將核酸探針分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針和人工合成的寡核苷酸探針等幾類。作為診斷試劑，較常使用的是基因組DNA探針和cDNA探針。其中，前者應(yīng)用最為廣泛，它的制備可通過酶切或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)從基因組中獲得特異的DNA后將其克隆到質(zhì)?；蚴删w載體中，隨著質(zhì)粒的復(fù)制或噬菌體的增殖而獲得大量高純度的DNA探針。將RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，所獲得的產(chǎn)物即為cDNA。cDNA探針適用于RNA病毒的檢測。c

3、DNA探針序列也可克隆到質(zhì)?；蚴删w中，以便大量制備。將信息RNA(mRNA)標(biāo)記也可作為核酸分子雜交的探針。但由于來源極不方便且RNA極易被環(huán)境中大量存在的核酸酶所降解，操作不便，因此應(yīng)用較少。用人工合成的寡聚核苷酸片段做為核酸雜交探針應(yīng)用十分廣泛，可根據(jù)需要隨心所欲合成相應(yīng)的序列，可合成僅有幾十個(gè)bp的探針序列，對(duì)于檢測點(diǎn)突變和小段堿基的缺失或插入尤為適用。2.按標(biāo)記物劃分有放射性標(biāo)記探針和非放射性標(biāo)記探針兩大類。放射性標(biāo)記探針用放

4、射性同位素做為標(biāo)記物。放射性同位素是最早使用，也是目前應(yīng)用最廣泛的探針標(biāo)記物。常用的同位素有32P、3H、35S。其中，以32P應(yīng)用最普遍。放射性標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，可以檢測到Pg級(jí)；缺點(diǎn)是易造成放射性污染，同位素半衰期短、不穩(wěn)定、成本高等。因此，放射性標(biāo)記的探針不能實(shí)現(xiàn)商品化。目前，許多實(shí)驗(yàn)室都致力于發(fā)展非放射性標(biāo)記的探針。目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素(Biotin)和地高辛(digoxigenin)。二者都是半抗原。生物素