熒光納米粒子DNA探針與核酸適配體篩選.pdf

1、本文第一部分就聚電解質(zhì)對水溶性量子點CdTe的熒光保護(hù)作用以及量子點在核酸檢測中的應(yīng)用作了相關(guān)研究。首先，采用靜電吸附的方法合成了聚電解質(zhì)保護(hù)的量子點-聚二烯丙基二甲基氯化銨（QDs-PDADMAC）納米復(fù)合物。該納米復(fù)合物呈現(xiàn)出卷曲的、長度不一的“柔性條帶”狀，條帶寬度約3-5nm。在聚電解質(zhì)PDADMAC的保護(hù)下，量子點的熒光量子產(chǎn)率不但沒有降低，且有效地防止了表面巰基類配體的脫落，進(jìn)而比量子點本身具有更明顯的時間穩(wěn)定性以及抗酸、堿

2、、氧化的穩(wěn)定性，與此同時，還保持了量子點的生物兼容性。
　　我們利用靜電吸附作用將單鏈核酸探針固定在QDs-PDADMAC納米復(fù)合物條帶的表面，制備了探針DNA/QDs-PDADMAC納米復(fù)合物，以此作為能量供體，并以溴化乙錠（EB）標(biāo)記的dsDNA作為能量受體，建立了一種基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的DNA檢測方法。與傳統(tǒng)的運(yùn)用化學(xué)鍵共價結(jié)合作用將核酸探針固定在納米粒表面制備熒光納米探針的方法相比，此方法更加簡單，快速。對F

3、RET體系中探針DNA的濃度、EB濃度，NaCl濃度進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳檢測條件。在優(yōu)化條件下對DNA進(jìn)行濃度檢測，方法表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性，信號穩(wěn)定，得到的定量限為7.7nM，線性范圍為7.7-61.6nM，且線性關(guān)系良好。本方法簡單、靈敏，同時實現(xiàn)了無標(biāo)記的DNA檢測。
　　現(xiàn)代分子醫(yī)學(xué)需要大量的探針用于識別和表征各種不同的癌細(xì)胞。適配體是一種單鏈DNA/RNA探針，具有與抗體類似的性質(zhì)，將作為分子探針廣泛的應(yīng)用于在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域

4、的應(yīng)用。本文通過基于細(xì)胞的指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（cell-SELEX），對完整的活細(xì)胞進(jìn)行適配體篩選，對PCR條件、非特異性結(jié)合、篩選壓力的調(diào)節(jié)等過程不斷優(yōu)化，在初始隨機(jī)DNA文庫中初步篩選出了對HL-60細(xì)胞特異性結(jié)合的適配體。HL-60細(xì)胞是急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，將其作為靶細(xì)胞對文庫進(jìn)行篩選，K562細(xì)胞為慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞，作為對照細(xì)胞進(jìn)行負(fù)篩，以增加適配體的特異性。以細(xì)胞為基礎(chǔ)的SELEX技術(shù)篩選適配體簡單，快速且穩(wěn)