基于核酸適配體熒光法檢測赭曲霉素A.pdf

1、第一章:簡單介紹了核酸適配體的定義和特點(diǎn)，赭曲霉素A(OTA)檢測的重要性和常用的檢測方法;綜述了基于核酸適配體檢測赭曲霉素A的不同方法;闡述了本論文的立題背景、研究內(nèi)容及創(chuàng)新點(diǎn)。
　　 第二章:利用核酸適配體熒光探針，基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理建立了一種檢測赭曲霉素A的熒光分析方法。赭曲霉素A在375 nm波長下激發(fā)，在430 nm處可以發(fā)熒光，赭曲霉素A與標(biāo)記有熒光素的核酸適配體結(jié)合后，兩者之間可發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，熒光素在

2、518nm處的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。根據(jù)518nm處熒光強(qiáng)度的變化可實(shí)現(xiàn)對赭曲霉素A的檢測。這種檢測方法簡單、快速、特異性強(qiáng)，檢出限達(dá)到了1 nmol/L。
　　 第三章:利用熒光素標(biāo)記的核酸適配體(FDNA)和熒光猝滅基團(tuán)(BHQ)標(biāo)記的互補(bǔ)寡聚核苷酸鏈(QDNA)建立了一種檢測赭曲霉素A的熒光分析法。未加入赭曲霉素A時(shí)，標(biāo)記有熒光素的核酸適配體與標(biāo)記有猝滅基團(tuán)的互補(bǔ)寡聚核苷酸鏈結(jié)合，熒光基團(tuán)與猝滅基團(tuán)靠近，導(dǎo)致熒光猝滅;當(dāng)加入赭曲霉

3、素A后，F(xiàn)DNA與赭曲霉素A高親和力高特異性結(jié)合，熒光基團(tuán)與猝滅基團(tuán)遠(yuǎn)離，F(xiàn)DNA的熒光信號得到恢復(fù)。根據(jù)FDNA與目標(biāo)物結(jié)合前后熒光強(qiáng)度的變化，可以實(shí)現(xiàn)對赭曲霉素A的定量檢測。
　　 第四章:利用赭曲霉素A本身的熒光特性，發(fā)展了一種通過熒光各向異性分析快速考察赭曲霉素A(OTA)與核酸適配體之間的相互作用的方法。赭曲霉素A與核酸適配體的特異性結(jié)合使分子體積增大，赭曲霉素A旋轉(zhuǎn)變慢，引起熒光各向異性值增大。通過熒光各向異性分析考

4、察了緩沖液成分中金屬離子對適配體親和力的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)Na+與Ca2+同時(shí)存在時(shí)赭曲霉素A與核酸適配體之間的親和力明顯增強(qiáng)，這與溶液中只有Ca2+時(shí)相比親和力增大了18倍，當(dāng)Ca2+不存在時(shí)適配體親和力完全消失。另外，利用熒光各向異性方法研究了核酸適配體突變對親和力的影響，對適配體親和力起重要作用的堿基可以被鑒別出。建立了一種基于適配體檢測OTA的熒光各向異性分析法，在緩沖液中固定適配體和OTA標(biāo)準(zhǔn)物的濃度，加入不同濃度的OTA待測物

5、，OTA熒光各向異性值會(huì)隨著待測物濃度的增加而降低，根據(jù)熒光各向異性值的變化可以實(shí)現(xiàn)對OTA的檢測。
　　 第五章:建立了一種采用單熒光基團(tuán)標(biāo)記的核酸適配體檢測赭曲霉素A的方法。當(dāng)標(biāo)記有熒光基團(tuán)的適配體與OTA結(jié)合時(shí)，熒光基團(tuán)周圍的環(huán)境發(fā)生變化，從而引起熒光強(qiáng)度的變化，根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化實(shí)現(xiàn)對OTA的檢測?？疾炝诉m配體不同位點(diǎn)上標(biāo)記熒光素（包括T堿基，3'端，5'端）對適配體親和力的影響，還考察了熒光素標(biāo)記的適配體對OTA的響應(yīng)