基于適配體熒光傳感器檢測IgE的方法研究.pdf

1、免疫球蛋白E(IgE)是一種分泌型免疫球蛋白，在人類過敏反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。一般情況下，IgE在人血清中的含量很低，然而在過敏性哮喘、過敏性皮炎或其他免疫缺陷病的病人血清內(nèi)，IgE含量會升高。因此，建立簡便、快速、靈敏的IgE的檢測方法對于過敏性疾病的臨床診斷至關(guān)重要。本文結(jié)合熒光光譜分析技術(shù)和具有高特異性識別能力的核酸適配體，建立了一種基于能量共振轉(zhuǎn)移原理的熒光傳感器檢測IgE的方法。
　　本文以花菁類熒光染料——Cy5和水溶性好

2、的碳納米材料——氧化石墨烯(GO)分別作為熒光能量的供體和受體。當(dāng)5'端標(biāo)記有Cy5的IgE的適配體核酸鏈和GO同時存在時，它們之間產(chǎn)生π-π共軛堆積作用，而被穩(wěn)定地吸附在GO的表面，Cy5與GO靠近，發(fā)生能量共振轉(zhuǎn)移，Cy5的熒光被猝滅。當(dāng)IgE存在時，核酸適配體與其特異性結(jié)合形成蛋白質(zhì)-適配體復(fù)合物，GO對復(fù)合物吸附能力減弱，復(fù)合物脫離GO的表面，Cy5的熒光信號得到恢復(fù)。實驗首先采用三維熒光光譜(3D-EMM)分析法對Cy5標(biāo)記適

3、配體后的熒光性質(zhì)進(jìn)行了分析，確定了633 nm為激發(fā)波長(Ex)，675 nm為發(fā)射波長(Em)。然后，根據(jù)熒光猝滅性能對氧化石墨烯(GO)等四種碳納米材料進(jìn)行了選擇，優(yōu)化了檢測體系的pH值和離子強(qiáng)度（Mg2+濃度），考察了適配體和IgE的孵育溫度和時間。結(jié)果表明，GO為最佳猝滅劑，檢測體系pH值為7.4，Mg2+濃度為1 mmol/L，37℃條件下，孵育30 min時，熒光信號恢復(fù)的響應(yīng)值最高。在最佳的實驗條件下，對不同濃度的IgE溶

4、液進(jìn)行檢測，得到0.05-10 nmol/L的線性范圍，檢出限為0.001nmol/L。與IgE結(jié)構(gòu)相似的IgG（免疫球蛋白G）和血清中大量存在的HSA（人血清白蛋白）在高濃度時對實驗體系的響應(yīng)值很低，說明本方法具有好的選擇性和高的特異性。
　　將本文建立的方法對血清樣品中IgE含量進(jìn)行檢測，用經(jīng)典的酶聯(lián)免疫法(ELISA)對檢測結(jié)果進(jìn)行驗證，兩種方法具有很好的一致性，因此說明本文方法高效、快速、靈敏，在實際臨床應(yīng)用中存在很大的潛