基于適配體的酶分子檢測新方法.pdf

1、第一章:簡要介紹了適配體,其中包括核酸適配體和多肽適配體的概念和優(yōu)點,論述了基于適配體檢測蛋白質(zhì)的方法應(yīng)用,闡述了本文的立題背景、研究內(nèi)容和創(chuàng)新點。
　　第二章:利用核酸適配體的高親和力和酶反應(yīng)的信號放大功能,發(fā)展了一種熒光分析法檢測活化蛋白 C。活化蛋白 C被修飾在磁球上的核酸適配體捕獲,之后特異性地催化熒光底物(D-Val-Pro-Arg-ANSNH-C4H9),生成熒光產(chǎn)物,通過測定產(chǎn)生的熒光產(chǎn)物的熒光強度實現(xiàn)對活化蛋白 C

2、的檢測。該方法簡便,靈敏度高,特異性強。當(dāng)活化蛋白C的樣品體積為250μL,催化反應(yīng)時間為2小時,檢出限為0.4 pM,對應(yīng)0.1 fmole的活化蛋白 C。凝血酶,胰蛋白酶,蛋白酶 K,胰凝乳蛋白酶,豬胰彈性蛋白酶對活化蛋白 C的檢測沒有影響。
　　第三章:我們利用親和性多肽適配體對凝血酶的特異性捕獲和凝血酶參與的酶催化反應(yīng),發(fā)展了一種靈敏度高,特異性強的凝血酶檢測法。凝血酶被多肽適配體修飾的磁球捕獲后,將熒光底物(N-p-to

3、syl-Gly-Pro-Arg-7-amido-4-methylcoumarin)催化水解生成熒光產(chǎn)物,通過測定產(chǎn)物的熒光強度來定量檢測凝血酶。100μL凝血酶樣品的檢出限為50 fM。該方法靈敏度高,選擇性好,并且可以用于人血漿樣品中凝血酶的檢測。
　　第四章:本章采用與第三章類似的檢測原理,使用凝血酶的一種生色底物(序列為 N-P-tosyl-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilide)來檢測凝血酶。我們以多肽適配體