親和吸附劑配體篩選新方法的研究.pdf

1、親和吸附劑由于具有選擇性高、適用性廣等優(yōu)點(diǎn)，在生物活性物質(zhì)分離、天然產(chǎn)物的提取及血液凈化、污水處理等方面得到廣泛的應(yīng)用。親和吸附劑的配體是決定親和吸附劑選擇性及分離效率的關(guān)鍵因素之一。因此，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)便、高效、靈敏的親和配體篩選方法是親和吸附劑研究的重要內(nèi)容。
　　 本論文利用納米金溶膠特殊的光學(xué)性質(zhì)，首次提出可視的親和配體篩選方法，并對(duì)此方法的有效性進(jìn)行研究。本文嘗試了兩種配體篩選方法：一種方法是將待選配體修飾在金顆粒上，另一種方

2、法是將吸附目標(biāo)物修飾在金顆粒上，分別向修飾后的金溶膠中加入吸附目標(biāo)物或含有配體的聚合物，通過(guò)觀察金溶膠的變色程度判斷配體與吸附目標(biāo)物的親和性。
　　 我們分別考察了這兩種配體篩選方法的有效性、靈敏度以及操作便捷性。根據(jù)篩選方法的需求，第一種方法選擇寡肽YpSPTpSPS為吸附目標(biāo)物，根據(jù)其結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)SH-Dpa-Zn2+、SH-DMA、SH-Guanidine、SH-Pyridine四種配體，期望其通過(guò)配位、靜電或氫鍵作用與目標(biāo)

3、肽結(jié)合；第二種方法選擇CGGFGGpSG為吸附目標(biāo)物，設(shè)計(jì)Dpa-Zn2+、DMAPAA、AAn三種配體，通過(guò)配位、靜電或疏水作用與目標(biāo)肽結(jié)合。分別通過(guò)兩種篩選方法評(píng)估配體與目標(biāo)肽的親和性，考察篩選方法的靈敏度；同時(shí)，制備含有相應(yīng)配體的吸附劑，通過(guò)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證兩種方法篩選配體的準(zhǔn)確性。
　　 研究結(jié)果表明，兩種篩選方法均是有效的，可以初步判斷配體與目標(biāo)物間的親和性。篩選出的親和性最強(qiáng)的配體制備的吸附劑對(duì)吸附目標(biāo)物均具有很強(qiáng)的

4、吸附能力。兩種篩選方法的操作便捷性相當(dāng)，第一種方法中金溶膠制備過(guò)程較繁瑣，第二種方法需合成含有各種配體的線性聚合物。兩種方法的差別在于：第一種配體篩選方法的靈敏度較低，金溶膠只對(duì)配體與目標(biāo)物間較強(qiáng)的相互作用產(chǎn)生顏色響應(yīng)，并且只有同時(shí)含有多個(gè)官能團(tuán)的吸附目標(biāo)物才能引起金溶膠聚集變色，因此其適用范圍較小；而在第二種篩選方法中，配體與目標(biāo)物間較弱的相互作用即可使金溶膠產(chǎn)生顏色變化，靈敏度大幅提高，且此方法是依靠聚合物中配體與金表面目標(biāo)物之間的

5、相互作用使金溶膠聚集變色的，對(duì)目標(biāo)物的官能團(tuán)數(shù)量沒(méi)有特殊要求。此方法消耗樣品量微少，操作較簡(jiǎn)便，是一種可視、靈敏的新型配體篩選方法。
　　 由于金顆粒表面的檸檬酸根呈負(fù)電性，可能影響篩選過(guò)程中配體與目標(biāo)物間的靜電作用。因此，我們選用聚乙二醇(PEG)作為金溶膠穩(wěn)定劑，考察不同分子量PEG對(duì)金溶膠穩(wěn)定性的影響；通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射的方法研究不同分子量PEG修飾金溶膠的Zeta電勢(shì)以及飽和修飾量，以此為基礎(chǔ)選擇PEG5k為金溶膠的穩(wěn)定劑，

6、以消除金溶膠的負(fù)電荷對(duì)配體與目標(biāo)物間靜電作用的影響。
　　 近年來(lái)，隨著分子模擬計(jì)算模塊的逐步完善，其在新藥設(shè)計(jì)及配體篩選中得到了廣泛的應(yīng)用。本文通過(guò)分子對(duì)接方法，為中藥有效成分吸附劑篩選高親和性配體。針對(duì)黃酮結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)了多種氫鍵類配體，通過(guò)Autodock計(jì)算成功篩選出對(duì)黃酮具有高親和性的二乙胺基配體。由此配體制備的吸附劑可以僅通過(guò)一次吸附洗脫即可從銀杏葉提取物中得到純度為99.4％的黃酮產(chǎn)品。
　　 此外，本文亦通