核酸適配體-小檗堿熒光體系的構(gòu)筑及分析應用.pdf

1、第一章：首先簡述了核酸適配體的概念、適配體的篩選過程（SELEX技術(shù)）及適配體的特性，并著重介紹了近年來基于適配體傳感體系的檢測技術(shù)及研究進展，最后闡述了論文的立題背景和研究內(nèi)容。
　　第二章：利用小檗堿作為熒光探針，與K+離子具有特異性親和作用且富含G序列的適配體序列作為識別元件，設計了一種簡便、快速的免標記適配體傳感體系。熒光染料小檗堿本身發(fā)射較弱的熒光信號，嵌入核酸適配體中形成小檗堿/核酸適配體復合物，熒光信號強度得到增強，

2、靶分子K+離子存在時，誘導核酸適配體構(gòu)象發(fā)生改變，形成穩(wěn)定的 G-四鏈體結(jié)構(gòu)，熒光信號顯著增強?；谝陨显韺崿F(xiàn)對 K+離子的靈敏性檢測，在0-1600 mM檢測 K+離子呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相對標準偏差為0.45％，檢出限為31 nM。最后，將該法應用于檢測人血清樣品，回收率為81.7-105.3％之間。利用該體系在溶液中檢測K+離子經(jīng)濟簡便、穩(wěn)定性好，該法可以被應用于其它靶分子的特異性檢測中。
　　第三章：本章構(gòu)建了一種免標記

3、的核酸適配體熒光傳感檢測平臺，用于高靈敏度、高選擇性檢測ATP。構(gòu)筑的熒光探針/核酸適配體體系，在與ATP分子結(jié)合后，能夠抵制Exo I對核酸適配體的降解作用，從而實現(xiàn)對ATP的靈敏性檢測。當沒有ATP存在時，Exo I將小檗堿/核酸適配體復合物的卷曲結(jié)構(gòu)降解，嵌入的小檗堿得以釋放，導致體系熒光強度驟然減弱；而當ATP存在時，由于核酸適配體穩(wěn)定的G-四鏈體結(jié)構(gòu)抵制了Exo I的降解作用，因此，體系熒光強度變化不大?；谝陨显?，實現(xiàn)了對

4、ATP的高靈敏度和高選擇性檢測。對影響分析檢測的實驗條件如適配體濃度、反應溫度與時間、Exo I的濃度等進行了詳細考察。在最佳實驗條件下ATP的響應范圍0-17.5 mM，檢出限為140 nM。
　　第四章：基于小檗堿與T-Hg2+-T構(gòu)型較強的相互作用設計了一種特異性較好的核酸適配體傳感平臺。以 Hg2+離子的特異性核酸適配體作為識別元素，小檗堿為熒光探針，對影響分析檢測的各種因素如探針濃度、核酸適配體濃度、酸度、反應時間等進行