基于磁性分離技術(shù)的化學(xué)發(fā)光適體傳感器檢測赭曲霉毒素A.pdf

1、赭曲霉毒素A（OTA）是一種具有很強(qiáng)毒性的真菌毒素，其毒性在真菌毒素家族中位列第二位，僅次于黃曲霉毒素。OTA在自然界分布廣泛，不僅污染谷物糧食，還嚴(yán)重污染動物性食品，對人類構(gòu)成極大的威脅。鑒于食品安全問題關(guān)乎整個社會的安危，應(yīng)當(dāng)引起全世界的高度關(guān)注，因此建立OTA的高靈敏簡便快速分析方法越發(fā)受到科研人員的重視。本論文基于不同的傳感模式和化學(xué)發(fā)光機(jī)理，構(gòu)建了幾種不同的適體傳感器，從而實現(xiàn)了OTA的化學(xué)發(fā)光檢測。且這幾種OTA適體傳感器均

2、以磁性微球作為分離和固定載體，實現(xiàn)傳感器的均相反應(yīng)異相分離。整篇論文內(nèi)容可分為如下三個部分：
　　第一部分基于 OTA適體鏈上的鳥嘌呤（G）堿基與化學(xué)發(fā)光試劑苯甲酰甲醛（PG）的瞬時衍生化反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的原理，以O(shè)TA適體為檢測探針，建立了一種無標(biāo)記適體傳感器，采用化學(xué)發(fā)光法（CL）實現(xiàn)了OTA的定量分析。隨著待測OTA濃度的增大，傳感器CL值逐漸減小，對比未加入OTA的空白組，引起的CL變量（?CL）逐漸增大。優(yōu)化實驗條件下，

3、OTA濃度在0.1~50ng/mL范圍內(nèi)，其對數(shù)值（X）與?CL（Y）呈現(xiàn)較好線性關(guān)系（r2=0.9952），最低檢出限為0.1ng/mL。對紅酒樣品進(jìn)行加標(biāo)回收，回收率在103.3％~112.5%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在4.2%~7.2%之間（n=3）。另外，結(jié)果顯示該無標(biāo)記適體傳感器化學(xué)發(fā)光檢測OTA具有較高特異性。
　　第二部分以金納米粒子作為標(biāo)記物，建立了一種適體傳感器，利用納米金催化魯米諾體系產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的機(jī)制，實

4、現(xiàn)OTA的定量分析。本法以O(shè)TA適體作為固定相，利用OTA與納米金標(biāo)記的報告序列競爭結(jié)合磁性微球表面OTA適體，從而得到OTA濃度與CL信號的呈一定相關(guān)性。最優(yōu)實驗條件下，OTA濃度在0.01~20ng/mL范圍內(nèi)，其對數(shù)值（ X）與?CL（ Y）呈良好線性關(guān)系（r2=0.9922），最低檢出限為0.01ng/mL。加標(biāo)回收率在104.1%~112.7%之間， RSD值在5.9%~8.7%之間（n=3）。經(jīng)考察，采用納米金標(biāo)記的適體傳感

5、器化學(xué)發(fā)光檢測OTA具有良好特異性。
　　第三部分沿襲第二部分的傳感原理，僅以辣根過氧化物酶（HRP）代替納米金作為標(biāo)記物，利用HRP催化魯米諾體系產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的原理，從而定量分析OTA。最優(yōu)實驗條件下，OTA濃度在0.01~50ng/mL范圍內(nèi)，其對數(shù)值（X）與?CL（Y）線性相關(guān)（r2=0.9898），最低檢出限為0.01ng/mL。加標(biāo)回收率在98.5%~109.3%之間，RSD值在5.2%~7.7%之間（n=3）。另外，本