基于赭曲霉毒素A噬菌體多肽模擬表位的免疫傳感器的研究.pdf

1、赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）主要是由青霉屬和曲霉屬代謝的次級產(chǎn)物，對人畜有強(qiáng)致癌性。因此，各國普遍加強(qiáng)了對OTA的監(jiān)管。免疫傳感器作為一種重要的分析手段，在OTA檢測中具有舉足輕重的地位。本研究采用金納米粒子(Gold nanoparticles，GNPs)和PEG聚合物(Mal-PEG-NH2)于金電極(Gold electrode，GE)表面合成功能化PEG聚合物刷，使anti-OTA-McAb與聚合物刷共價偶聯(lián)

2、，并通過特異性結(jié)合OTA噬菌體多肽模擬表位，建立了基于免疫學(xué)競爭原理的OTA傳感器。主要研究內(nèi)容如下：
　　1.基于OTA噬菌體多肽模擬表位建立ELISA
　　分別以O(shè)TA噬菌體多肽模擬表位與人工抗原為免疫元件建立了ELISA。測得以人工抗原/anti-OTA-McAb建立的ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.20~13.52 ng/mL，半抑制濃度(Half inhibition concentration,IC50)為1.

3、66 ng/mL；以O(shè)TA噬菌體模擬表位/anti-OTA-McAb建立的Phage-ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性范圍為0.01~0.57 ng/mL，IC50為0.09 ng/mL。
　　2.基于OTA噬菌體多肽模擬表位建立傳感器
　　2.1.GNPs-傳感器
　　采用循環(huán)伏安(cyclic voltammetry,CV)一步沉積法在金電極表面修飾GNPs，將3-巰基丙酸(3-mercaptopropionic aci

4、d,MPA)共價鍵與GNPs偶聯(lián)，接著固定anti-OTA-McAb于電極表面。從而制備了GNPs-免疫傳感器，其線性范圍0.15~1.84 pg/mL，IC50值為0.53 pg/mL，最低檢測限( Limit of detection,LOD)為20.48 fg/mL。
　　2.2.GNPs-Mal-PEG-NH2-免疫傳感器
　　以電沉積的方式將GNPs沉積在金電極表面，再通過層層自組裝依次將MPA、半胱氨酸(Cyst

5、eine, Cys)和Mal-PEG-NH2修飾在電極上作為固定抗體的電極基質(zhì)，制備了GNPs-Mal-PEG-NH2免疫傳感器。該傳感器的IC50為81.85 fg/mL，線性范圍9.51~703.84 fg/mL，LOD為2.05 fg/mL，與GNPs-免疫傳感器相比，靈敏度提高了近10倍。該傳感器與AFB1、DON、ZEN和FB1無明顯交叉反應(yīng)。在啤酒和玉米樣品中的加標(biāo)回收率分別為99.33％~107.30%和89.61%~10