灰樹花的菌種誘變、液體發(fā)酵米糠麩皮產(chǎn)多糖及富硒研究.pdf

1、灰樹花是一種珍稀的食藥兩用真菌,其多糖具有輔助抗腫瘤治療、增強(qiáng)人體免疫功能等作用,在液體培養(yǎng)過程中可將無機(jī)硒轉(zhuǎn)化為對人體有益的有機(jī)硒。米糠、麩皮是稻谷、小麥加工過程中的副產(chǎn)品,其營養(yǎng)價值高、產(chǎn)量大且價格低廉,有更廣闊的開發(fā)利用空間。本研究通過誘變篩選出了能在米糠、麩皮培養(yǎng)基上快速生長和高產(chǎn)多糖的優(yōu)良菌株,探索其較優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的組成及活性多糖的提取方法,并研究了灰樹花出發(fā)菌株富集硒的能力,為采用新的方法完成科研項(xiàng)目制備多糖和多糖有機(jī)硒復(fù)合

2、保健品的任務(wù)奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究主要內(nèi)容如下:
　　 (1)經(jīng)微波誘變、紫外誘變、原生質(zhì)體激光誘變和原生質(zhì)體微波-紫外復(fù)合誘變,篩選出菌絲生長速度較快、菌絲多糖產(chǎn)量較高且比較穩(wěn)定的灰樹花變異菌株JSU10-1和JSU10-2。通過電泳圖譜分析,推斷其與出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179相比發(fā)生了遺傳上的變化。
　　 (2)通過培養(yǎng)基均勻試驗(yàn)的探索,采用SPSS回歸分析得到出發(fā)菌株Grifola

3、sp.CGMCC4179菌絲干重Y1-0(g／100mL)、變異菌株JSU10-1菌絲干重Y1-1(g／100mL)、變異菌株JSU10-2菌絲干重Y1-2(g／100mL)與米糠x1(g／100mL)、麩皮x2(g／100mL)、磷酸二氫鉀x3(g／100mL)、硫酸鎂x4(g／100mL)、維生素B1 x5(mg／100mL)的回歸方程分別為:
　　 Y1-0=0.031x1+0.033x2-0.002x3-0.039x4-

4、0.003x3+0.053
　　 Y1-1=0.035x1+0.036x2-0.267x3-0.077x4+0.013x5+0.094
　　 Y1-2=0.039x1+0.048x2-0.200 x3+0.479 x4+0.018x5+0.030得到Grifola sp.CGMCC4179菌絲多糖Y2-0(mg／100mL)、JSU10-1菌絲多糖Y2-1(mg／100mL)、JSU10-2菌絲多糖Y2-2(mg／100

5、mL)與米糠x1(g／100mL)、麩皮x2(g／100mL)、磷酸二氫鉀x3(g／100mL)、硫酸鎂x4(g／100mL)、維生素B1x5(mg／100mL)的回歸方程分別為:
　　 Y2-0=4.118x1+4.137 x2+17.019x3-3.301x4-0.991x5-3.993
　　 Y2-1=2.660x1+3.962 x2-52.626 x3-66.141x4+8.413x5+27.176
　　

6、 Y2-2=4.298x1+7.899 x2-20.019 x3+80.371x4+0.363 x5-20.617經(jīng)回歸分析,推測出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179最優(yōu)培養(yǎng)基成分為:米糠12 g／100mL,麩皮12 g／100 mL,磷酸二氫鉀0.35 g／100 mL,硫酸鎂0.01 g／100 mL,維生素B10.2 mg／100 mL:變異菌株JSU10-1最優(yōu)培養(yǎng)基成分為:米糠12 g／100 mL,麩皮12g／

7、100 mL,磷酸二氫鉀0.02 g／100 mL,硫酸鎂0.01 g／100 mL,維生素B11.8 mg／100 mL；變異菌株JSU10-2最優(yōu)培養(yǎng)基成分為:米糠12 g／100 mL,麩皮12 g／100 mL,磷酸二氫鉀0.02 g／100 mL,硫酸鎂0.17 g／100 mL,維生素B11.8 mg／100 mL。
　　 (3)通過米糠、麩皮纖維素酶酶解單因素試驗(yàn)探索,確定酶添加量為50FPU／(g米糠)和45FP

8、U／(g麩皮),酶解時間分別為米糠10h、麩皮10.5h；酶解料液比分別為米糠1:20、麩皮1:30。
　　 (4)通過灰樹花菌株在液體發(fā)酵培養(yǎng)基B上發(fā)酵菌絲干重變化試驗(yàn)的探索,確定變異菌株JSU10-1最大菌絲干重為1.019g／100mL,最大菌絲多糖量為156.7mg／100mL,比同條件下Grifola sp.CGMCC4179分別提高21.3％和21.8％,其中發(fā)酵培養(yǎng)基B1組成為:米糠2 g／100ml(50℃酶解后

9、取汁),麩皮12 g／100ml(50℃酶解后取汁),磷酸二氫鉀0.11 g／100ml,硫酸鎂0.09 g／100ml,維生素B11.4 mg／100ml。JSU10-2最大菌絲干重為0.935g／100mL,最大菌絲多糖量為166.5mg／100mL,比同條件下Grifola sp.CGMCC4179分別提高15.4％和41.8％,其中發(fā)酵培養(yǎng)基B2組成為:米糠8g／100ml(50℃酶解后取汁),麩皮9 g／100ml(50℃酶解

10、后取汁),磷酸二氫鉀0.08 g／100ml,硫酸鎂0.23 g／100ml,維生素B10.8 mg／100ml。
　　 (5)通過灰樹花菌絲多糖超聲提取均勻試驗(yàn)探索,推測出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179和變異菌株JSU10-2最優(yōu)超聲條件為:超聲料液比1:120、超聲功率200W、超聲時間23min、超聲發(fā)出時間6s、超聲間隙時間6s,此時,其菌絲多糖得率達(dá)到最大,分別為15.5％和15.3％；變異菌株JSU1

11、0-1最優(yōu)超聲條件為:超聲料液比1:20、超聲功率200W、超聲時間23min、超聲發(fā)出時間1s、超聲間隙時間6s,此時其菌絲多糖得率達(dá)到最大,為10.3％。對不同灰樹花菌絲及不同提取方法所得菌絲多糖清除DPPH·能力探索,確定超聲輔助低溫低壓提取(70℃,0.07MPa,2h+2h)所得菌絲多糖對DPPH·的清除率相對較高,效果相對較好。
　　 (6)通過對Grifola sp.CGMCC4179液態(tài)發(fā)酵富硒的探索,當(dāng)硒添加量

12、為10mg／L時,富硒菌絲干重為1.256g／100mL,其富硒率為46.3％；富硒菌絲多糖為114.4mg／100mL,其富硒率為2.2％。將該富硒菌絲多糖制備成300meg粒的富硒灰樹花粗多糖保健膠囊,每粒膠囊含硒71.9μg,與成年人體硒的需求量76μg／d接近,即正常成年人每日服一粒該富硒多糖保健膠囊便可達(dá)到硒的攝入標(biāo)準(zhǔn)。這一結(jié)果對制備灰樹花富硒保健食品或藥品有一定的參考價值。其中發(fā)酵培養(yǎng)基組成:米糠10g／100ml,麩皮11