轉(zhuǎn)化米糠麩皮高產(chǎn)多糖的灰樹花菌株誘變和已有菌的發(fā)酵試驗(yàn).pdf

1、灰樹花是一種珍稀的藥食兩用真菌,其多糖具有輔助抗腫瘤治療、增強(qiáng)人體免疫功能等作用。米糠、麩皮是稻谷、小麥加工過程中的副產(chǎn)品,其營養(yǎng)價(jià)值高、產(chǎn)量大且價(jià)格低廉,有更廣闊的開發(fā)利用空間。為了高值化轉(zhuǎn)化米糠和麩皮,高產(chǎn)灰樹花多糖,本研究圍繞尋求“轉(zhuǎn)化米糠麩皮產(chǎn)多糖的灰樹花高效菌株”科研目標(biāo)進(jìn)行研究,通過紫外誘變篩選出了能在米糠、麩皮培養(yǎng)基上進(jìn)一步快速生長和高產(chǎn)多糖的優(yōu)良菌株,對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的兩株還未進(jìn)行過不取汁液體發(fā)酵評(píng)價(jià)的灰樹花高產(chǎn)菌株進(jìn)行了發(fā)

2、酵試驗(yàn),為今后采用不取汁米糠麩皮培養(yǎng)基發(fā)酵奠定了基礎(chǔ)。
　　 本研究主要內(nèi)容如下:
　　 (1)在原有紫外誘變所得菌株的基礎(chǔ)上再次采用紫外進(jìn)一步誘變,篩選出菌絲生長速度較快、菌絲多糖產(chǎn)量較高且比較穩(wěn)定的灰樹花變異菌株5號(hào)、14號(hào)和19號(hào)菌株,其中以19號(hào)菌株分解纖維素的能力最強(qiáng)。經(jīng)電泳圖譜等分析,推斷其與出發(fā)菌株Grifola sp.JUS10-2相比遺傳上發(fā)生了一定的的變化。
　　 (2)通過灰樹花UVW-1、

3、LWW-5的米糠麩皮不取汁發(fā)酵單因素試驗(yàn),確定米糠或麩皮單一添加量不得大于30g/L,兩者混合總添加量不得超過60g/L,灰樹花菌株UVW10-5分解纖維素的能力比灰樹花UVW-1更強(qiáng),且麩皮對(duì)灰樹花發(fā)酵的影響更為顯著。
　　 (3)在液體發(fā)酵培養(yǎng)基A上,通過培養(yǎng)基均勻試驗(yàn)的探索,采用SPSS回歸分析得到Grifola sp.UVW-1,胞外多糖YA1-1(mg/100mL)、菌絲多糖YA1-2(mg/100mL)、菌絲干重Y1

4、-2(g/100mL)與米糠x1(g/L)、麩皮x2(g/L)的回歸方程分別為:YA1-1=-35.9+12.625x1+14.783x2-1.182x1xx2YA1-2=8.531 x1+0.844 x2+0.08x12+0.257 x22-0.321x1xx2+8.863YA1-3=0.202+0.001x1xx2
　　 在試驗(yàn)范圍內(nèi),當(dāng)x1=30,x2=30時(shí),UVW-1胞外多糖YA1-1、UVW-1胞內(nèi)多糖YA1-2和菌

5、絲干重YA1-3取得最大值,分別為622.54 mg/100mL、211.769 mg/100mL和1.102g/100mL。
　　 在液體發(fā)酵培養(yǎng)基B上,通過培養(yǎng)基均勻試驗(yàn)的探索,采用SPSS回歸分析得到Grifola sp.UVW-1和UVW-5,胞外多糖yB1-1和yB5-1(mg/10.0mL)、菌絲混合多糖YB1-2和YB5-2(mg/100mL)、菌絲混合干重YB1-3(g/100mL)與米糠x1(g/L)、麩皮x2

6、(g/L)的回歸方程分別為:YB1-1=0.232x22+0.216 x1xx2+173.45YB1-2=184.521+0.001x12YB1-3=0.14+0.035x1+0.051x2YBS-1=148.078+7.938x1+0.277x2YB5-2=68.337+0.116x1xx2
　　 在試驗(yàn)范圍內(nèi),當(dāng)x1=30,x2=30時(shí),JSU10-1胞外多糖YB1-1和UVW-5胞外多糖Yas-2、UVW-1菌絲混合多糖Y

7、B1-2和菌絲混合多糖YB5-2以及菌絲干重YB1-3分別取得最大值,其分別為:567.65mg/100mL和635.518mg/100mL、193.521mg/100mL和172.737g/100mL以及2.720g/100mL。
　　 (4)灰樹花菌種UVW-5在10L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)相較于搖瓶發(fā)酵,其各個(gè)生長階段均滯后與搖瓶發(fā)酵,但總體變化趨勢(shì)基本相同。搖瓶發(fā)酵最終胞外多糖濃度和菌絲固形物干重分別為120mg/100mL2.

8、4g/100mL左右。發(fā)酵罐放大培養(yǎng)最終胞外多糖濃度和菌絲固形物干重分別為110mg/100mL和1.5g/100mL左右。這可能與發(fā)酵罐在發(fā)酵過程中補(bǔ)給無菌水將發(fā)酵液稀釋有關(guān)。
　　 (5)灰樹花VVW-1、UVW-5不取汁發(fā)酵生產(chǎn)的多糖清除羥基自由基試驗(yàn)結(jié)果顯示:在0.2～1mg/mL有效范圍內(nèi),隨著灰樹花多糖濃度的增加,清除羥基自由基的作用逐漸增強(qiáng)?；覙浠║VW-1菌絲混合物多糖和胞外多糖、UVW-5菌絲混合物多糖和胞外多

9、糖清除羥基自由基的ECS0分別為:0.48 mg/mL、0.80 mg/mL、0.37mg/mE、0.45 mg/mL。由此看出UVW-5發(fā)酵產(chǎn)生的多糖比UVW-1發(fā)酵所生產(chǎn)的多糖清除羥基自由基的能力要高,而菌絲混合物多糖的活性又比胞外多糖的要強(qiáng)。
　　 (6)灰樹花UVW-1、UVW-5不取汁發(fā)酵生產(chǎn)的多糖還原能力試驗(yàn)結(jié)果顯示:在1.2～2.0 mg/mL有效濃度范圍內(nèi),隨著灰樹花多糖濃度的增加,還原力逐漸增強(qiáng),但增強(qiáng)幅度相對(duì)