灰樹花菌種誘變及發(fā)酵和產物性能研究.pdf

1、灰樹花含有較高量的蛋白質、氨基酸、維生素和礦物質，比其他蘑菇高出一倍，是種珍貴的藥食兩用菌?；覙浠ǘ嗵蔷哂休o助抗腫瘤、調節(jié)人體免疫和抗衰老等作用。我國是農業(yè)大國，谷物副產品產量多且價格低廉，其營養(yǎng)價值高，具有廣闊的經濟增值空間。為了高效利用米糠麩皮并高產灰樹花多糖多糖，在不添加其它碳源氮源的情況下，本研究通過物理誘變篩選出利用全米糠麩皮高產多糖的誘變菌株，優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基的組成，探索了出發(fā)菌株和變異菌株的多糖體外抗氧化活性，為今后低投入

2、、高產出灰樹花多糖產業(yè)化奠定理論和應用基礎。
　　 本研究的主要內容如下:
　　 (1)通過微波誘變、紫外誘變對灰樹花進行誘變，篩出菌絲生長速度較快且菌絲密實，菌絲多糖產率較高且較穩(wěn)定的變異菌株JSU13-1和JSU13-2。通過拮抗性試驗、電泳試驗分析，推斷誘變菌株發(fā)生遺傳上的變化。
　　 (2)通過對液體發(fā)酵培養(yǎng)基均勻試驗的探索，采用SPSS回歸分析得到JSU13-1和JSU13-2在液體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌絲混

3、合干重Y1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y2(mg/100mL)和胞外多糖Y3(mg/100mL)為因變量，米糠X1(g/100mL)、麩皮X2(g/100mL)、KH2PO4X3(g/100mL)、MgSO4·7H2O X4(g/100mL)為自變量的關系方程。菌株JSU13-1菌絲混合干重Y1-1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y1-2(mg/100mL)和胞外多糖Y1-3(mg/100mL)和米糠X1(g/100mL)、麩皮X2

4、(g/100mL)、KH2PO4 X3(g/100mL)、MgSO4·7H2O X4(g/100mL)的回歸方程分別為:Y1-1=0.53X1+0.571X2-0.119X3+0.538X4-0.163Y1-2=26.763X1+22.427X2-61.591X3+7.387X4-17.230Y1-3=41.202X1+81.712X2+21.659X3+151.907X4-17.874
　　 菌株JSU13-2菌絲混合干重Y1

5、-1(g/100mL)、菌絲混合多糖Y1-2(mg/100mL)和胞外多糖Y1-3(mg/100mL)和米糠X1(g/100mL)、麩皮X2(g/100mL)、KH2PO4X3(g/100mL)、MgSO4·7H2OX4(g/100mL)的回歸方程分別為:Y2-1=0.536X1+0.560X2-0.353X3+0.570X4-0.235Y2-2=32.275X1+42.244X2+72.571X3+58.332X4-81.330Y2-

6、3=58.163X1+91.186X2-106.754X3+153.171X4-38.696
　　 經回歸分析，菌株JSU13-1和JSU13-2的最佳培養(yǎng)基組成都為:米糠3g/100mL、麩皮3g/100mL, KH2PO4為0.25 g/100mL, MgSO4·7H2O0.25g/100mL，維生素B11mg/100 mL。
　　 (3)10L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)的結果，小于搖瓶發(fā)酵，可以解釋為即便保證了均勻的通氣量，但

7、在下罐時可觀察到罐壁上附著很多失活的菌絲，使罐內的菌絲體數(shù)量較大程度下降，多糖產量降低;另一方面，在上罐發(fā)酵時，為了測發(fā)酵天數(shù)對菌絲混合干重、菌絲混合多糖和胞外多糖的影響，每隔24h取樣100mL，取樣量也對發(fā)酵液有影響，從而上罐發(fā)酵的結果小于搖瓶發(fā)酵。
　　 (4)出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179和變異菌株JSU13-1、JSU13-2的胞外多糖和菌絲混合多糖都是不含蛋白質的非淀粉類多糖。對誘變菌株的灰樹花多糖

8、進行紅外光譜掃描分析，均顯示出具有一般多糖類物質的特質吸收峰。
　　 (5)通過清除羥自由基、DPpH·和還原能力三組實驗，研究了不過濾米糠麩皮發(fā)酵所產生的多糖的體外抗氧化活性。結果表明出發(fā)菌株Grifola sp.CGMCC4179和變異菌株JSU13-1、JSU13-2的胞外多糖和菌絲混合多糖都具有一定的抗氧化活性，并且抗氧化能力隨著多糖濃度的增而不同程度的增加。另一方面，誘變菌種發(fā)酵所得的灰樹花多糖的抗氧化能力都高于原始菌