輻照對(duì)ATP生物發(fā)光法檢測(cè)脫水蔬菜中細(xì)菌含菌量的影響.pdf

1、ATP(adenosine triphosphate，三磷酸腺苷又稱腺苷三磷酸)生物發(fā)光測(cè)定技術(shù)具有方便、快捷等特點(diǎn)，加之對(duì)ATP測(cè)定的特異性和高靈敏度，因而在臨床醫(yī)學(xué)的細(xì)菌檢驗(yàn)方面得到了廣泛的應(yīng)用，并為世界衛(wèi)生組織(WHO)所確認(rèn)，目前這一技術(shù)在發(fā)達(dá)國(guó)家已越來越多地用于細(xì)菌的檢驗(yàn)。
　　 應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)測(cè)定細(xì)菌方法的理論基礎(chǔ)在于ATP普遍存在于包括細(xì)菌在內(nèi)的一切活細(xì)胞內(nèi)，并且在一定條件下其含量相對(duì)穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)菌死亡時(shí)體內(nèi)

2、的ATP將被自身的酶所降解，從而使得ATP的存在成為檢測(cè)樣品中有無細(xì)菌的依據(jù)；在定量測(cè)定ATP的方法中，以熒光素-熒光素酶測(cè)定法最為靈敏，當(dāng)所有反應(yīng)物過量時(shí)，其發(fā)光強(qiáng)度與ATP的數(shù)量成正比，因此根據(jù)細(xì)菌ATP提取液的發(fā)光強(qiáng)度即可推算出樣品含菌量的多少。
　　 但高岳等(2007)在應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)檢測(cè)脫水香蔥和胡椒粉的輻照滅菌效果時(shí)，卻出現(xiàn)了樣品細(xì)菌ATP提取液的發(fā)光強(qiáng)度均高于對(duì)照，與實(shí)際含菌量動(dòng)態(tài)變化不一致的現(xiàn)象，其影響

3、機(jī)理尚不清楚，目前也未見報(bào)道。
　　 為了使ATP生物發(fā)光檢測(cè)技術(shù)能在產(chǎn)品的輻照滅菌效果方面得以應(yīng)用，本文圍繞輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：
　　 1、應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)分別檢驗(yàn)輻照處理后脫水蔬菜中的含菌量，均出現(xiàn)了發(fā)光強(qiáng)度與實(shí)際含菌量?jī)烧邉?dòng)態(tài)變化不一致的現(xiàn)象，說明了輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響具有普遍性。
　　 2、通過光譜分析可以看出：
　　 1)輻

4、照前、后樣品細(xì)菌ATP提取液生物發(fā)光光譜的波長(zhǎng)范圍相同，光譜峰值對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)也無顯著差異，依據(jù)以上兩個(gè)光譜特征分析，輻照并未改變樣品的發(fā)光性質(zhì)，由此可以認(rèn)定輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響是通過ATP生物發(fā)光系統(tǒng)表現(xiàn)出來的。
　　 2)輻照對(duì)樣品細(xì)菌ATP提取液生物發(fā)光光譜的峰值產(chǎn)生了影響。光譜曲線峰值的升高，說明輻照處理增加了樣品細(xì)菌ATP提取液中ATP的濃度。
　　 3、對(duì)高溫滅菌后的脫水蔬菜進(jìn)行輻照處理，并

5、應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)檢測(cè)樣品的發(fā)光強(qiáng)度，結(jié)果表明輻照后的脫水蔬菜材料本身并沒有對(duì)ATP的生物發(fā)光強(qiáng)度產(chǎn)生影響；而應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)檢測(cè)輻照處理后大腸桿菌菌液的含菌量時(shí)，卻出現(xiàn)了發(fā)光強(qiáng)度與實(shí)際含菌量不一致的現(xiàn)象，說明輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響來自于輻照處理后的細(xì)菌。
　　 4、輻照處理后大腸桿菌菌液樣品中游離ATP的發(fā)光強(qiáng)度均極顯著的高于對(duì)照。發(fā)光強(qiáng)度的升高說明輻照處理已明顯的增加了樣品中游離ATP的數(shù)量。輻

6、照處理并未增加LB無菌培養(yǎng)液ATP的生物發(fā)光強(qiáng)度，樣品中增加的游離ATP只能來自于輻照后的大腸桿菌。
　　 5、對(duì)大腸桿菌總ATP酶活性的測(cè)定結(jié)果顯示輻照劑量越大、樣品總ATP酶的活性就越低。ATP酶是分解ATP的專一性酶，ATP酶活性的降低，使死亡細(xì)菌體內(nèi)ATP的降解受阻，增加了樣品中游離ATP的數(shù)量。
　　 6、在去除樣品中游離ATP后，樣品細(xì)菌ATP提取液的生物發(fā)光強(qiáng)度與樣品的含菌量?jī)烧叩膭?dòng)態(tài)變化已趨于一致，由此可

7、以說明輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響是由于樣品中游離ATP濃度的增加所造成的。
　　 綜上所述，輻照對(duì)脫水蔬菜細(xì)菌ATP生物發(fā)光檢測(cè)的影響是由于電離輻射在殺滅樣品中細(xì)菌的同時(shí)，也降低了細(xì)菌體內(nèi)ATP酶的活性，使死亡細(xì)菌體內(nèi)的ATP不能隨細(xì)菌的死亡而迅速降解，并從細(xì)菌體內(nèi)擴(kuò)散出來，從而增加了樣品中游離ATP的數(shù)量，導(dǎo)致了細(xì)菌ATP提取液的發(fā)光強(qiáng)度與實(shí)際含菌量動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)的不一致。因此在應(yīng)用ATP生物發(fā)光技術(shù)檢測(cè)產(chǎn)品的輻