真菌脂肪酶的液態(tài)發(fā)酵、固定化及其應(yīng)用.pdf

1、由于堿性脂肪酶水解脂肪具有高效，反應(yīng)條件溫和，無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)，在洗滌劑、制革、食品、紡織及輕工業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛的用途。作為一種新型的酶制劑，堿性脂肪酶已成為世界酶制劑市場(chǎng)上重要的品種。因此對(duì)堿性脂肪酶的研究，無(wú)論是在理論上還是在實(shí)踐上均有重要的意義。 本實(shí)驗(yàn)著眼點(diǎn)，是在堿性脂肪酶的發(fā)酵生產(chǎn)并將其固定化酶在應(yīng)用上做了初步的研究。論文總體分為三部分： 1.對(duì)80個(gè)在青島海域采集的水樣、海藻、海泥及海蟄消化道內(nèi)的樣品進(jìn)行分離，篩選

2、出一株產(chǎn)酶活較高的菌株H-19，其在維多利亞藍(lán)的平板上所產(chǎn)的藍(lán)綠圈較大。經(jīng)過在光鏡下進(jìn)行菌絲形態(tài)的觀察，初步鑒定為青霉菌。由此對(duì)該菌產(chǎn)脂肪酶的液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成(％)：葡萄糖1.0，大豆油1.0，蛋白胨1.0，(NH<,4>)<,2>SO<,4> 0.5，NaCl 2.75，KCl 0.1，MgCl<,2> O.5，MgSO<,4>·7H<,2>O 0.2，CaCl<,2> 0.05；發(fā)酵培養(yǎng)基起始pH8.0，發(fā)

3、酵溫度28℃，搖床轉(zhuǎn)速180r/nlin，發(fā)酵周期48小時(shí)，脂肪酶的活力可達(dá)17.43U/mL。通過硫酸銨沉淀，透析脫鹽及G-100凝膠層析對(duì)該酶進(jìn)行了純化，使得純化倍數(shù)達(dá)到10倍，比活為1.1U/mg。通過對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的研究，了解到該酶的最適反應(yīng)溫度36℃，半失活溫度達(dá)到60℃，最適反應(yīng)pH為9.4，在pH9.0-10.2之間有較好的穩(wěn)定性。 2.采用吸附法與交聯(lián)法2種方法將堿性脂肪酶的酶粉固定在疏水載體上，制備固定化酶。

4、用改性的硅膠通過戊二醛交聯(lián)得到的酶的回收率較高在90％，而用大孔樹脂固定化其酶的回收率在73％，酶活均能達(dá)到25—30U/g。對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)的研究表明：固定化酶對(duì)外界環(huán)境因素，如溫度、pH、有機(jī)溶劑等有較好的耐受性，明顯優(yōu)于游離酶。而大孔樹脂固定的酶耐受性更為強(qiáng)一些，如在pH 8.6-10.0的范圍內(nèi)固定化酶的酶活較為穩(wěn)定，從最適作用溫度的36℃到50-60℃，仍然有原始酶活的50％。但是在反應(yīng)穩(wěn)定性上，還是用交聯(lián)法固定的酶比較穩(wěn)定，在反