脂肪酶產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件的研究.pdf

1、生物柴油是一種環(huán)保型可再生的新型潔凈能源，是以動(dòng)、植物油脂，餐飲廢油等作原料，經(jīng)過(guò)與醇類(lèi)(甲醇、乙醇)轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)而獲得的液體燃料，其具有優(yōu)良的燃燒性能和環(huán)保特性、較好的發(fā)動(dòng)機(jī)低溫啟動(dòng)性能與潤(rùn)滑性能，可與石化柴油以任意比例混合使用。 發(fā)展生物柴油對(duì)推進(jìn)能源替代，控制城市大氣污染，保護(hù)生態(tài)環(huán)境具有童要意義。加快生物柴油的產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程，對(duì)我國(guó)能源經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展，具有現(xiàn)實(shí)意義。 脂肪酶(Lipsae)是一類(lèi)酯鍵水解酶，主要用于分

2、解各種天然的油脂。脂肪酶在微生物中分布廣泛，根據(jù)統(tǒng)計(jì)有65個(gè)屬的微生物產(chǎn)脂肪酶。 本文主要進(jìn)行以下方面的研究： (1) 產(chǎn)脂肪酶菌株的分離篩選：從南昌地區(qū)不同地點(diǎn)采集含油的土樣50份，在以橄欖油為底物、溴甲酚紫為指示劑的平板培養(yǎng)基上分離、篩選到兩株脂肪酶產(chǎn)生菌，分別命名為R32和R36。通過(guò)對(duì)菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及主要生理生化特征的初步研究，確定R32為裂殖酵母屬，R36為假絲酵母屬，分別命名為Schizosacch

3、aromyces R32和Candida Valida R36，搖瓶發(fā)酵的初始酶活分別為13.50U/mL、13.83U/mL。 (2) 菌株誘變：以Candida Valida R36為出發(fā)菌株，經(jīng)過(guò)第一階段的三輪紫外線(xiàn)(UV)90s劑量誘變、第二階段的亞硝基胍500ug/mL劑量誘變、第三階段的亞硝基胍與紫外線(xiàn)復(fù)合誘變后，正變率為43.5％。篩選得到一株產(chǎn)酶活力相對(duì)較高的突變菌株Candida Valida R36T2，搖

4、瓶發(fā)酵酶活達(dá)到94.2U/mL． (3) 發(fā)酵條件研究：通過(guò)單因素比較實(shí)驗(yàn)和四因素三水平的正交試驗(yàn)，對(duì)Candida valida R36T2進(jìn)行了發(fā)酵培養(yǎng)基成分和發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化研究。結(jié)果表明其最優(yōu)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基為(g/L)：橄欖油15.0，黃豆粉30.0，糊精10.0，NH<,4>NO<,3>10.0，MgSO<,4>·7H<,2>O 1.0，K<,2>HPO<,4> 2.0，Tween 80 0.5；在發(fā)酵條件為：30