L-絲氨酸產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件的研究.pdf

1、本論文對(duì)發(fā)酵法生產(chǎn)L-絲氨酸進(jìn)行了研究。研究?jī)?nèi)容主要包括了L-絲氨酸產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件的優(yōu)化。 采用紙層析分光光度計(jì)法對(duì)發(fā)酵液中L-絲氨酸進(jìn)行了定性、定量分析，繪制出了L-絲氨酸和甘氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并推導(dǎo)出了通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)計(jì)算發(fā)酵液中L-絲氨酸和甘氨酸含量的計(jì)算公式。研究發(fā)現(xiàn)該法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，并且操作方便、易于掌握，非常適合在L-絲氨酸產(chǎn)生菌篩選中應(yīng)用。 以實(shí)驗(yàn)室保藏微球菌株LJW-01(D-SerR

2、，GlyR，MthR)為出發(fā)菌株，采用DES和NTG誘變，分別以磺胺胍(SG)和高濃度甘氨酸為藥物平板，以蛋氨酸為缺陷型，成功選育出一株絲氨酸產(chǎn)量較高菌株ZC-8(D-SerR，GlyHR，MthR，SGR，Met-)，該菌株在未經(jīng)優(yōu)化的條件下發(fā)酵液中可積累L-絲氨酸6.2g/L，比出發(fā)菌株產(chǎn)量提高了一倍多。通過(guò)傳代實(shí)驗(yàn)表明，該菌產(chǎn)酸穩(wěn)定，遺傳標(biāo)記較好的保存，適合發(fā)酵生產(chǎn)L-絲氨酸。 對(duì)菌株ZC-8的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)

3、化，確定最優(yōu)種子培養(yǎng)基組成為(g/L)：葡萄糖20，玉米漿20，(NH4)2SO420，KH2PO41，MgSO4·7H2O0.2。最佳培養(yǎng)條件：裝液量為40mL/250mL三角瓶，搖瓶轉(zhuǎn)速為100r/min，培養(yǎng)溫度為30℃，pH7.0～7.5，種齡為10h。最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L)：甘氨酸35，葡萄糖5，(NH4)2SO422，KH2PO41，MgSO4·7H2O0.8，玉米漿14，CaCO320。發(fā)酵最佳搖瓶培養(yǎng)條件：裝液量