L-精氨酸高產(chǎn)菌種的選育及發(fā)酵研究.pdf

1、L-精氨酸(L-Arg)是一種半必需堿性氨基酸,是生物體的重要代謝產(chǎn)物,在食品、醫(yī)藥、飼料等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用。本文利用物理和化學(xué)誘變方法相結(jié)合,通過(guò)賦予出發(fā)菌株結(jié)構(gòu)類似物抗性和氨基酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型選育,獲得一株L-Arg產(chǎn)量明顯提升的菌株,并對(duì)該菌株的發(fā)酵條件和代謝調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了初步的探索。
　　 1.培養(yǎng)基的優(yōu)化:
　　 確定了發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)葡萄糖、硫酸銨、碳酸鈣、硫酸鎂、磷酸氫二鉀的最佳濃度分別為80g／L、25g／L、

2、15g／L、0.5／L、1g／L,生物素和硫胺素的最佳添加量為80ug／L和160g／L。優(yōu)化過(guò)后的培養(yǎng)基,在相同條件下發(fā)酵96h,L-Arg產(chǎn)量為0.71g／L,相比原始菌株提高了31.5％。
　　 2.紫外單因子誘變:
　　 考察UV單獨(dú)作用時(shí)的致死率,確定誘變條件為40s,經(jīng)過(guò)多批次誘變、結(jié)構(gòu)類似物D-Arg抗性平板篩選和連續(xù)傳代穩(wěn)定性測(cè)定,獲得一株高產(chǎn)菌BC307(D-Argr),其結(jié)構(gòu)類似物抗性濃度為4g／L,

3、L-Arg產(chǎn)量為2.94g／L。
　　 3.硫酸二乙酯單因子誘變:
　　 考察DES單獨(dú)作用時(shí)的致死率,確定誘變濃度為1％,經(jīng)過(guò)多批誘變和結(jié)構(gòu)類似物D-Arg抗性平板篩選,所得菌株的產(chǎn)量非但沒(méi)有明顯提高反而有下降,說(shuō)明硫酸二乙酯單獨(dú)作用效果很差。
　　 3.紫外線和硫酸二乙酯復(fù)合誘變:
　　 考察復(fù)合誘變的致死率,確定誘變條件為:紫外照射10s加硫酸二乙酯濃度1％,經(jīng)過(guò)多批誘變、結(jié)構(gòu)類似物D-Arg抗性平

4、板篩選和傳代穩(wěn)定性測(cè)定,獲得一株高產(chǎn)菌BC307130315(D—Argr),其結(jié)構(gòu)類似物抗性提升到6g／L,L-Arg產(chǎn)量為4.48g／L。
　　 4.脯氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的選育:
　　 BC307130315為出發(fā)菌株復(fù)合誘變處理,探討了饑餓培養(yǎng)時(shí)間、二氮培養(yǎng)時(shí)間,青霉素的添加濃度與處理時(shí)間。經(jīng)過(guò)多批次復(fù)合誘變、脯氨酸平板篩選和傳代穩(wěn)定性考察獲得BC30713031584菌株,其結(jié)構(gòu)類似物抗性為6g／L,L-Arg產(chǎn)