高產(chǎn)L-異亮氨酸菌種的選育及其發(fā)酵條件研究.pdf

1、本論文根據(jù)代謝控制發(fā)酵和代謝流分析理論，研究了高產(chǎn)菌L-異亮氨酸選育及其發(fā)酵條件。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 應(yīng)用“薄層層析法”“HPLC”對發(fā)酵液中L-異亮氨酸進(jìn)行了定量分析研究，確立了L-異亮氨酸定量測定條件和計(jì)算方法。采用“HPLC-UV法”、“HPLC-OPA法”以及高速氨基酸分析儀進(jìn)行了L-異亮氨酸含量的測定對比，OPA法測定結(jié)果的準(zhǔn)確度比UV法更高。應(yīng)用HPLC法測定L-異亮氨酸是一種比較方便而且較為準(zhǔn)確的方法。

2、 以黃色短桿菌T6-13為出發(fā)菌株，經(jīng)硫酸二乙酯(DES)和紫外線誘變處理，搖管初篩、搖瓶復(fù)篩、遺傳標(biāo)記驗(yàn)證、單菌落分離和連續(xù)傳代，篩選出一株L-異亮氨酸生產(chǎn)菌株AJS406(Met-+α-ABr)。該菌株在未經(jīng)優(yōu)化的條件下可積累L-異亮氨酸9.2g/L。 確定了親株AJS406和F9114原生質(zhì)體形成和再生及進(jìn)行原生質(zhì)體融合的最佳條件，采用原生質(zhì)體融合技術(shù)最終篩選出一株帶有目的遺傳標(biāo)記的L-異亮氨酸高產(chǎn)菌LA412(Leu-

3、+Met-+α-ABr)。該菌株在未優(yōu)化條件下可產(chǎn)L-異亮氨酸14.3g/L。經(jīng)驗(yàn)證，菌株IA412的遺傳性能穩(wěn)定。 研究了菌株IA412的搖瓶分批發(fā)酵條件。應(yīng)用均勻設(shè)計(jì)和MATLAB軟件獲得該菌株優(yōu)化的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基配比，并對種子培養(yǎng)條件和發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究。在優(yōu)化條件下，菌株IA412搖瓶分批發(fā)酵96h，可產(chǎn)L-異亮氨酸20.7g/L。 以搖瓶分批發(fā)酵最優(yōu)條件為依據(jù)，進(jìn)行200噸發(fā)酵罐分批發(fā)酵放大試驗(yàn)，確