L-纈氨酸產(chǎn)生菌的選育及其發(fā)酵條件的調(diào)控.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、要提高發(fā)酵工業(yè)中L-纈氨酸的產(chǎn)量和質(zhì)量,必須對生產(chǎn)菌種的選育及其工藝條件的優(yōu)化兩方面進行深入研究。目前代謝控制育種已成為了菌種改良的主要策略。本研究探索了L-纈氨酸產(chǎn)生菌NJ-5的選育、最佳發(fā)酵條件的確定以及三株菌的代謝流分析比較等,主要的研究內(nèi)容及結果如下:
　　 (1)以黃色短桿菌(Brebvibacterium flavum)NV128和JV16(Leu'Ile'Met")為親本菌株,通過單滅活原生質(zhì)體融合,在高糖梯度平板

2、上篩選出一株抗高糖融合子NJ-2,經(jīng)搖瓶發(fā)酵72h,產(chǎn)酸可達42.3g/L。并研究了影響原生質(zhì)體融合的幾個重要條件(青霉素、蛋清溶菌酶和滲透壓穩(wěn)定劑),確定了最佳處理濃度和時間。
　　 (2)對原生質(zhì)體融合獲得的菌株NJ-2進行高糖梯度傳代適應性培養(yǎng)及同步富集培養(yǎng),并經(jīng)紫外線(UV)和硫酸二乙酯(DES)逐級誘變處理,以高濃度α-氨基丁酸(α-AB)和2-噻唑丙氨酸(2-TA)平板定向篩選,獲得一株L-纈氨酸產(chǎn)生菌NJ-5(Gl

3、cnhrα-ABr2-Tar),該菌在未優(yōu)化條件下發(fā)酵72h,產(chǎn)酸達到47.2g/L。
　　 (3)利用正交設計試驗對菌株NJ-5的種子培養(yǎng)基進行了優(yōu)化,確定了種子培養(yǎng)基的最佳組成(g/L):葡萄糖25,KH2PO41,(NH4)2SO43,MgSO4·7H2O0.5,玉米漿40,CaCO310;最佳裝液量為25mL/250mL,最佳初始pH為7.0。
　　 (4)對影響菌株NJ-5的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件進行了研究。

4、在單因素的實驗基礎上,甩Design Expert軟件建立響應曲面模型,優(yōu)化了影響發(fā)酵培養(yǎng)基組成的三個重要因素,確定了搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基最佳組成(g/L):葡萄糖135,(NH4)2SO445,KH2PO41.2,MgSO4·7H2O0.6,玉米漿10.1,VH75μg/L,VB190μg/L,CaCO330;最佳培養(yǎng)條件為:pH7.0～7.5,接種量為5％。同時在該優(yōu)化的條件下,發(fā)酵72 h,搖瓶產(chǎn)酸達52.3g/L;7L發(fā)酵罐產(chǎn)酸達53

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