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文檔簡介
1、微生物催化法生產(chǎn)丙烯酰胺具有反應(yīng)條件溫和、選擇性高、產(chǎn)品純度高和收率高等優(yōu)點(diǎn)。微生物菌種腈水合酶的合成能力是影響丙烯酰胺生產(chǎn)水平和經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵因素。本文從采集土樣中分離到一株能利用丙烯腈生產(chǎn)丙烯酰胺的菌株，采用16S rRNA等現(xiàn)代分類技術(shù)并結(jié)合生理生化實(shí)驗(yàn)等經(jīng)典分類技術(shù)對該菌株進(jìn)行了分類鑒定。同時(shí)還研究了該菌株產(chǎn)酶條件和丙烯酰胺轉(zhuǎn)化條件。
通過對長期被腈化物污染的土壤中的微生物富集培養(yǎng)和篩選，得到一株具有腈水合酶活力為
2、428U/mL的菌株ZH8，且該菌株表現(xiàn)出較強(qiáng)的底物耐受性。通過形態(tài)觀察、生理生化實(shí)驗(yàn)、16S rRNA基因序列分析和BIOLOG系統(tǒng)鑒定方法，該菌株鑒定為紅球菌屬（Rhodococcus）菌種，命名為Rhodococcus sp.ZH8。
建立了Rhodococcus sp.ZH8的產(chǎn)酶條件，發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖15g/L、酵母粉5g/L、尿素7g/L、Co2+10 × 10-5mol/L、KH2PO40.5g/L、K2H
3、PO40.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、谷氨酸鈉1g/L；培養(yǎng)條件：種齡25h、接種量6％、培養(yǎng)溫度28℃、轉(zhuǎn)速180r/min。菌體培養(yǎng)60h后酶活達(dá)到了855U/mL。
Rhodococcus sp.ZH8的生長過程表明培養(yǎng)液pH，殘余葡萄糖含量、細(xì)胞密度與酶活之間存在相關(guān)性。優(yōu)化后產(chǎn)酶條件：培養(yǎng)液pH維持在7.0左右、菌體培養(yǎng)24h后添加的尿素為9g/L，培養(yǎng)周期為72h，發(fā)酵結(jié)束后酶活達(dá)到了4628
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