單寧酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、單寧酶是由微生物產(chǎn)生的一類(lèi)具有降解沒(méi)食子單寧作用的酶類(lèi)，在食品、飼料、化妝品、醫(yī)藥和制革等行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景，已引起人們的廣泛關(guān)注。本課題從選育單寧酶產(chǎn)生菌的基礎(chǔ)性工作開(kāi)始，對(duì)初篩得到目的菌株進(jìn)行了誘變處理，對(duì)選育到突變菌株產(chǎn)酶發(fā)酵條件和培養(yǎng)基成分進(jìn)行了優(yōu)化研究，并對(duì)菌株產(chǎn)單寧酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了初步探究。
　　 從富含單寧的自然環(huán)境中取樣，經(jīng)富集培養(yǎng)、平板分離篩選、固體發(fā)酵初篩等方法篩選得到46株產(chǎn)單寧酶的菌株。再通過(guò)固體發(fā)

2、酵復(fù)篩，獲得一株產(chǎn)酶活性較高的菌株1-39，酶活力為1.58IU/g（干基）。依據(jù)菌株菌落、菌體形態(tài)觀察，該菌株屬于絲狀真菌霉菌，命名為DNM1-39。
　　 以菌株DNM1-39為出發(fā)菌株，通過(guò)紫外線、硫酸二乙酯單獨(dú)和復(fù)合誘變處理，篩選獲得一株酶活有明顯提高的突變株UD-6，其固體發(fā)酵酶活力達(dá)到2.55IU/g（干基），較出發(fā)菌株提高了62.8％。
　　 通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)菌株UD-6發(fā)酵產(chǎn)酶條件和培養(yǎng)基成分進(jìn)行了

3、優(yōu)化，經(jīng)過(guò)極差、方差分析和多重比較，確定的最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度30℃，鹽溶液pH值6.0，培養(yǎng)基裝量12g/250mL（三角瓶），發(fā)酵周期60h；最佳培養(yǎng)基組成為：麩皮做培養(yǎng)基的固體支撐物和碳源，固液比1:1，鹽溶液的成分（g/100mL）為單寧0.75、氯化鈉0.5、七水硫酸鎂0.5、硫酸銨1.0、硫酸錳0.1、硫酸鋅0.05、氯化銨1.5。此條件下，菌株UD-6產(chǎn)酶活最高可達(dá)到5.61IU/g（干基），比優(yōu)化前提高了120％。