一株腈水合酶產(chǎn)生菌株的選育和發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、丙烯酰胺是一種用途廣泛的精細(xì)化工產(chǎn)品，主要用于生產(chǎn)聚丙烯酰胺及其衍生物。聚丙烯酰胺可用作水處理絮凝劑、紙張增強(qiáng)劑、鉆井防卡劑、纖維處理劑、粘合劑等。近年來，隨著國內(nèi)三次采油技術(shù)的廣泛應(yīng)用，聚丙烯酰胺的需求量日益增長，因而作為其單體的丙烯酰胺也是供不應(yīng)求，市場前景非常樂觀。 由于微生物法生產(chǎn)丙烯酰胺與化學(xué)法相比具有高效性、高選擇性、反應(yīng)條件溫和、成本低和環(huán)境污染小等優(yōu)點，多年來一直為研究的熱點之一。腈水合酶作為生物催化法生產(chǎn)丙烯酰

2、胺的催化劑，能催化丙烯腈生成丙烯酰胺。選育出高活力腈水合酶產(chǎn)生菌株是整個生物法生產(chǎn)的關(guān)鍵。本文對菌株的選育以及發(fā)酵條件的優(yōu)化作了深入的研究，主要研究成果如下： 從化工廢水處理廠的活性污泥中分離篩選獲得 1 株高活力腈水合酶產(chǎn)生菌株 T5，腈水合酶活力為 415.1U。通過物理誘變劑紫外線和化學(xué)誘變劑硫酸二乙酯對菌株 T5 進(jìn)行復(fù)合誘變處理，選育出菌株HUST-1，酶活達(dá)到688.3U。 通過對菌株HUST-1的生理生化特

3、征及16S rDNA序列分析，初步將菌株HUST-1歸屬為 Rhodococcus sp．，命名為Rhodococcus sp．HUST-1。對 HUST-1 發(fā)酵產(chǎn)生腈水合酶的溫度、pH等條件進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn) C0<'2+>、酪氨酸對腈水合酶有明顯的誘導(dǎo)激活作用，對菌株HUST-1的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化，確定菌株HUST-1 的最適發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)為：葡萄糖20，酵母粉 10，MgSO<,4>.7H<,2>O 0.5，K2HPO<