一株L-Met產(chǎn)生菌的鑒定和發(fā)酵條件研究.pdf

1、采集了川西高原溫泉水樣，對這幾處溫泉水樣的好氧菌群分布進行了初步研究，隨著溫度的升高，各溫泉中菌落數(shù)也相應(yīng)的減少，其中二道泉水樣菌落數(shù)為60-80個/mL；毛紡廠30-40個/mL；折多塘和木格措溫泉溫度達到90℃，菌落分布很少，只有2-3個/mL。從中篩選得到一株具M-海因水解酶系統(tǒng)、能積累L-甲硫氨酸的菌株MR。本文對此菌株進行了鑒定，并調(diào)節(jié)其生長和發(fā)酵條件，提高底物特異性轉(zhuǎn)化活力，增加L-Met的產(chǎn)量。 此菌株革蘭氏染色反

2、應(yīng)為陽性；菌體呈桿狀；具有芽孢形態(tài)。周生鞭毛，鞭毛長且粗。提取菌株DNA，擴增16S rRNA并將其連接、轉(zhuǎn)化入宿主細胞，鑒定重組子后提取質(zhì)粒測序。通過生理生化和16S rRNA鑒定，將此菌歸為芽孢桿菌屬，地衣芽孢桿菌(Bicilus licheniformis)。將其命名為MR。 單因子實驗：研究發(fā)酵碳、氮源、pH、通氣量、溫度、誘導(dǎo)物的添加及其質(zhì)量濃度等對發(fā)酵產(chǎn)L-Met的影響。選擇蔗糖、NH<,4>NO<,3>、pH為7.

3、5左右、10mL/50mL的裝瓶量、50℃、誘導(dǎo)物，此時L-Met產(chǎn)量提高近2倍，海因酶活力也明顯提高。考慮到底物在水溶液中溶解度較低，在發(fā)酵液中不能完全利用。嘗試在水-水溶性有機溶劑體系中探討菌株發(fā)酵情況。由于所選的幾種有機溶劑性質(zhì)不同，其對菌株發(fā)酵產(chǎn)L-Met也有不同的影響。有的抑制菌株的生長和發(fā)酵產(chǎn)量，有的對發(fā)酵產(chǎn)量影響不大，而丙酮和甲醇在此體系中能夠有效的提高L-Met的產(chǎn)量，增加底物的有效利用。最后確定當(dāng)甲醇的質(zhì)量分數(shù)為10％