中縫背核內(nèi)注射5-HT1A藥物對睡眠物質(zhì)的影響與陰陽寤寐學(xué)說相關(guān)性的研究.pdf

1、研究背景和目的:睡眠是人類的一項(xiàng)基本生理活動(dòng)，到目前為止，睡眠的機(jī)制還在探討研究中?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)通過解剖學(xué)、神經(jīng)化學(xué)、藥理學(xué)、生理病理學(xué)等一系列研究指出，睡眠周期伴隨著腦內(nèi)一系列物質(zhì)的規(guī)律變化，存在促進(jìn)睡眠的抑制性物質(zhì)和促進(jìn)覺醒的興奮性物質(zhì)。中醫(yī)古籍也早已記錄了對睡眠疾病的認(rèn)識。《內(nèi)經(jīng)》以陰陽學(xué)說為綱領(lǐng)，奠定了中醫(yī)睡眠醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)，此后的眾多醫(yī)家均以陰陽學(xué)說為立論，從各個(gè)方面對睡眠進(jìn)行了發(fā)展性的闡釋。結(jié)合中醫(yī)與西醫(yī)對睡眠的認(rèn)識，我們可以認(rèn)為，

2、睡眠的發(fā)生伴有“陰性”物質(zhì)的增加，而覺醒的發(fā)生是“陽性”物質(zhì)的增加。本研究的目的是根據(jù)陰陽寤寐學(xué)說的指導(dǎo)，觀察中縫背核內(nèi)微量注射5-HT1A受體激動(dòng)劑8-OH-DPAT和5-HT1A受體阻滯劑WAY100635所產(chǎn)生大鼠下丘腦內(nèi)睡眠相關(guān)物質(zhì)GLU、GABA及GABAB受體的變化，運(yùn)用中藥右歸丸與左歸丸平衡腦內(nèi)物質(zhì)的改變，探索睡眠時(shí)腦內(nèi)物質(zhì)可能的變化規(guī)律，為陰陽寤寐學(xué)說建立生理學(xué)基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:成年健康雄性SD大鼠（260g-

3、320g），隨機(jī)分為空白對照組(n=5)、8-OH-DPAT組(n=5)、8-OH-DPAT+右歸丸灌胃組(n=5)、8-OH-DPAT+生理鹽水灌胃組(n=5)、WAY100635組(n=5)、WAY100635+左歸丸灌胃組(n=5)、WAY100635+生理鹽水灌胃組(n=5)。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉(35mg/KG)，腦立體定位圖譜確定中縫背核位置(-7.9mm，0.0mm，-6.4mm)，利用腦立體定位儀將微量注射系統(tǒng)套管

4、垂直插入中縫背核中，固定于顱骨后縫合。每只大鼠手術(shù)后均休息7天。通過透明導(dǎo)管向中縫背核內(nèi)微量注射5-HT1A受體激動(dòng)劑8-OH-DPAT(100ng，0.4μl)，5-HT1A受體阻滯劑WAY100635(100ng，0.4μl)，滅菌生理鹽水(0.4μl)，連續(xù)微量注射3天后冰上斷頭處死，取下丘腦檢測腦內(nèi)睡眠物質(zhì)變化情況，腦干區(qū)域留存定位。根據(jù)物質(zhì)變化結(jié)果予中藥右歸飲和左歸飲及生理鹽水連續(xù)灌胃7天后建立8-OH-DPAT+右歸丸灌胃組

5、、8-OH-DPAT+生理鹽水灌胃組、WAY100635+左歸丸灌胃組和WAY100635+生理鹽水灌胃組，第8天冰上斷頭處死，取下丘腦檢測腦內(nèi)睡眠物質(zhì)變化情況，腦干區(qū)域留存定位。采用冰凍切片技術(shù)觀察腦干立體定位針道;高效液相色譜法測定大鼠下丘腦區(qū)域GLU和GABA含量變化;WesternBlotting檢測下丘腦區(qū)域GABAB受體表達(dá)量變化。
　　結(jié)果:①與空白對照組相比較，8-OH-DPAT組GLU含量降低，GABA含量升高，

6、二者差異顯著(p＜0.05)，下丘腦內(nèi)抑制性物質(zhì)占優(yōu)勢;與空白對照組相比，WAY100635組GLU含量升高，GABA含量降低，二者差異顯著(p＜0.05)，下丘腦內(nèi)興奮性物質(zhì)占優(yōu)勢;②與生理鹽水灌胃組相比，WAY100635+左歸丸灌胃組GLU含量降低，GABA含量升高，兩組差異顯著(p＜0.05);與生理鹽水灌胃組相比，8-OH-DPAT+右歸丸灌胃組GLU含量升高，GABA含量降低，兩組差異顯著(p＜0.05);③與空白對照組相比

7、，WAY100635組的GABABR1a和GABABR1b表達(dá)量均降低，差異顯著(p＜0.05);8-OH-DPAT組的GABABR1a和GABABR1b受體表達(dá)量均升高，差異顯著(p＜0.05)。④與生理鹽水灌胃組相比，WAY100635+左歸丸灌胃組、8-OH-DPAT+右歸丸灌胃組的GABABR1a和GABABR1b受體表達(dá)量未見明顯差異(p＞0.05)，中藥灌胃對GABAB表達(dá)量影響不顯著。
　　結(jié)論:①中縫背核內(nèi)微量注射