慢性間歇低氧對(duì)大鼠上氣道中樞調(diào)控和動(dòng)力學(xué)的影響及中縫背核5--HT1A受體在其中的介導(dǎo)作用.pdf

1、目的:
　　本課題旨在通過(guò)建立CIH大鼠模型，應(yīng)用TMS、上氣道臨界閉合壓測(cè)定、頦舌肌肌電記錄、大腦立體定位以及大鼠中縫背核微量注射等技術(shù)探討CIH對(duì)大鼠上氣道動(dòng)力學(xué)影響及中樞介導(dǎo)機(jī)制。
　　方法:
　　1、CIH對(duì)大鼠頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、頦舌肌和上氣道動(dòng)力學(xué)的影響
　　選取雄性Wistar（SPF級(jí)）大鼠24只，將大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分成慢性間歇低氧組(CIH，n=8)、空氣對(duì)照組(NO，n=8)和低氧4周后復(fù)氧

2、組（REO，n=8）。其中CIH組和REO組給予間歇低氧處理，低氧時(shí)間為:每天從8:00至16:00置于低氧艙中（8小時(shí)/天）;低氧模式設(shè)定為:低氧10％維持45秒，21％維持72秒，180秒循環(huán)。CIH組和NO組分別在實(shí)驗(yàn)的第1、3、7、14、21和28天比較各組Pcrit，頦舌肌肌電EMG和頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)TMS反應(yīng)潛伏期和振幅的變化。在各個(gè)時(shí)間測(cè)量TMS以及記錄EMG時(shí)分別在第10min，20min，30min，40min，50m

3、in和60min記錄，連續(xù)記錄60min，并于CIH的第1周，第2周，和第4周取大鼠頦舌肌肌肉組織進(jìn)行電鏡標(biāo)本制作。
　　2、CIH條件下，激動(dòng)大鼠中縫背核5-HT1A受體后對(duì)大鼠頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、頦舌肌和上氣道動(dòng)力學(xué)的影響以及5-HT1A受體以及GIRK-2的表達(dá)
　　建立CIH模型和低氧循環(huán)方式同前，其中測(cè)量組的大鼠分為:單純低氧組(CIH，n=6)、低氧給予PBS組（CIH+PBS，CP組n=6）和低氧給予5-HT1A

4、受體激動(dòng)劑組（CIH+AG，CAG組n=6）。開始低氧前，參考大鼠大腦立體定位圖譜(The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates，6th Ed)采用大鼠大腦立體定位儀（68005，深圳瑞沃德生命科技有限公司）定位大鼠中縫背核，前囟后7.8mm，深度6.4mm(AP:-7.8mm，DV:6.4mm)。待大鼠術(shù)后恢復(fù)4-5天后開始低氧，每天給予5-HT1A受體激動(dòng)劑8-OH-DPAT濃度為0.4mM，劑量

5、0.1μl。分別在實(shí)驗(yàn)的第1、3、7、14、21和28天比較各組大鼠的Pcrit、頦舌肌EMG以及頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)TMS反應(yīng)的潛伏期和振幅，記錄方法及采集時(shí)間點(diǎn)同前;標(biāo)本組的大鼠同樣分為:單純低氧組(CIH，n=6)、低氧給予PBS組（CIH+PBS，CP組n=6）和低氧給予5-HT1A受體激動(dòng)劑組（CIH+AG，CAG組n=6）。定位中縫背核方法同前，每天給予5-HT1A受體激動(dòng)劑8-OH-DPAT（劑量濃度同前），分別在實(shí)驗(yàn)的第1、

6、3、7、14、21和28天處死大鼠并留取大鼠中縫背核區(qū)域用于測(cè)定5-HT1A受體和GIRK-2通道蛋白的免疫組化。比較各組大鼠的免疫組化結(jié)果的差異。
　　結(jié)果:
　　1、CIH對(duì)大鼠頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、頦舌肌和上氣道動(dòng)力學(xué)的影響
　　(1)CIH時(shí)可以引起頦舌肌肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，主要表現(xiàn)為線粒體空泡變性，內(nèi)外膜模糊和排列紊亂等。(2)CIH可以引起頦舌肌的肌電升高，表現(xiàn)為在CIH第2周開始升高，但是并不能維持60mi

7、n，在CIH的第4周可以出現(xiàn)穩(wěn)定的升高，持續(xù)可達(dá)60min，表現(xiàn)為一種長(zhǎng)時(shí)程易化的改變;CIH可以引起頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)的TMS反應(yīng)增強(qiáng)，在第1天即可出現(xiàn)潛伏期的縮短，但是這種增強(qiáng)反應(yīng)隨著當(dāng)天低氧結(jié)束后復(fù)氧的時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減弱，不能持續(xù)到60min，在CIH的第7天開始，頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)的TMS反應(yīng)呈現(xiàn)出一種長(zhǎng)時(shí)程易化的改變，興奮性的增強(qiáng)可以在當(dāng)天低氧結(jié)束后維持60min，呈現(xiàn)一種長(zhǎng)時(shí)程易化的改變。(3)CIH時(shí)可以引起大鼠上氣道臨界閉合

8、壓的負(fù)值減小，即可塌陷性增高。
　　2、CIH條件下，激動(dòng)大鼠中縫背核5-HT1A受體后對(duì)大鼠頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、頦舌肌和上氣道動(dòng)力學(xué)的影響以及5-HT1A受體以及GIRK-2的表達(dá)
　　(1)與單純低氧組相比，激動(dòng)中縫背核5-HT1A受體后使CIH引起的增強(qiáng)的TMS反應(yīng)下降，表現(xiàn)為潛伏期的延長(zhǎng)(P＜0.05)。(2)激動(dòng)中縫背核5-HT1A受體后頦舌肌的肌電受到抑制(P＜0.05)。(3)激動(dòng)中縫背核5-HT1A受體后上氣道

9、臨界閉合壓與CIH組比較并沒有明顯的變化。(4)CIH時(shí)，中縫背核5-HT1A受體表達(dá)水平先升高后降低，在第1天、第3天和第7天開始升高，從第14天開始回落到正常水平;比較慢性間歇各組時(shí)發(fā)現(xiàn)，在第七天表達(dá)量最高(P＜0.05);激動(dòng)DRN的5-HT1A受體后，5-HT1A受體的表達(dá)水平增高，在第3天、第7天和第14天表現(xiàn)為比CIH+PBS組升高(P＜0.05)，組間比較發(fā)現(xiàn)在第7天表達(dá)量最高，第21天開始表達(dá)量下降至與CIH+PBS組無(wú)

10、差異。(5)CIH時(shí)中縫背核GIRK-2蛋白的表達(dá)增高的時(shí)間在5-HT1A受體增高之后，表現(xiàn)為在慢性間歇低第7天升高，隨后在14天開始回落到正常水平(P＜0.05)。(6)激動(dòng)中縫背核5-HT1A受體后，與CIH+PBS組比，GIRK-2蛋白表達(dá)量在第3天和第14天升高，第21天開始表達(dá)量下降至與CIH+PBS組無(wú)差異。
　　結(jié)論:
　　1、CIH可以引起上氣道肌肉結(jié)構(gòu)損傷，同時(shí)可以引起頦舌肌運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)活動(dòng)和頦舌肌肌電的長(zhǎng)時(shí)