5-HT及其5-HT2A受體在大鼠丘腦前核的表達(dá).pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過觀察5-羥色胺(5-HT)及其5-羥色胺2A受體(5-HT2AR)在Sprague-Dawley(SD)大鼠丘腦前核的表達(dá)情況，探討5-HT及5-HT2AR與學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系，從蛋白水平為兩者參與學(xué)習(xí)記憶提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD成年大鼠16只（光鏡組10只，電鏡組6只），雄性，體重200-250g。由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，4％水合氯醛腹腔麻醉（1ml/100g體重），開胸暴露心臟，直視下將

2、灌注針經(jīng)左心室插至升主動(dòng)脈。剪開右心耳，快速灌注生理鹽水200ml直至右心耳流出液無色透明，再灌注固定液4%多聚甲醛(pH7.4)300ml（電鏡標(biāo)本用4%多聚甲醛-0.5%戊二醛混合液300ml），前100ml快速灌注，后200ml緩慢灌注，持續(xù)灌注約2h。灌畢立即取腦，剔除腦表面的腦膜，并置于上述新鮮固定液中4℃后固定過夜，最后在振動(dòng)切片機(jī)上連續(xù)冠狀切片，片厚30μm（電鏡標(biāo)本50μm）。切取3套，一套用于5-HT，一套用于5-HT

3、2AR，一套做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。漂浮法免疫組織化學(xué)ABC法觀察5-HT及5-HT2AR在丘腦前核內(nèi)的表達(dá)情況，包埋前免疫電鏡技術(shù)觀察丘腦前核群的5-HT能神經(jīng)纖維終末。應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測(cè)量5-HT免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物的平均光密度值(A)，5-HT2AR免疫組化陽(yáng)性神經(jīng)元的平均灰度值，所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行配對(duì)資料t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：1.5-HT免疫組化結(jié)果：光鏡下，大鼠丘腦前核群的前、中、后部?jī)?nèi)均可見大量棕黃色的免疫反應(yīng)

4、陽(yáng)性的5-HT能神經(jīng)纖維終末，高倍鏡下可見纖維終末走行距離較長(zhǎng)，呈串珠狀。其中背側(cè)核(anterodorsal nucleus，AD)標(biāo)記神經(jīng)元著色較深，纖維密集，而腹側(cè)核(anterovental nucleus,AV)標(biāo)記神經(jīng)元著色較淺，纖維稀疏。AD內(nèi)的5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值(A)與AV的5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物平均光密度值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。陰性對(duì)照未見陽(yáng)性表達(dá)。
　　 電鏡下，可見免疫

5、反應(yīng)陽(yáng)性5-HT能神經(jīng)軸突終末，終術(shù)直徑約（0.89±0.41）μm，(n=131)，終末多為圓形或卵圓形，內(nèi)含圓形突觸小泡和線粒體。它們作為突觸前成分主要形成非對(duì)稱性軸-樹突觸。
　　 2.5-HT2AR免疫組化結(jié)果：在丘腦前核AD、AV內(nèi)可見黃色的5-HT2AR免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元，其中AD的神經(jīng)元胞體較大，著色較深，免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物平均灰度值與AV的免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物平均灰度值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。免疫反應(yīng)陽(yáng)