5-HT2A受體參與孕期酒精暴露抑制新生大鼠延髓腦片基本節(jié)律性放電.pdf

1、背景:酗酒已成為遍及全球的公共衛(wèi)生問題，會(huì)對社會(huì)產(chǎn)生諸多不良影響，近年來，女性飲酒現(xiàn)象越來越普遍，母體孕期飲酒會(huì)嚴(yán)重影響胎兒的生長發(fā)育，如引起宮內(nèi)缺氧、致畸形、流產(chǎn)、早產(chǎn)、低體重兒等，還可引起胎兒酒精綜合征(fetal alcoholsyndrome，F(xiàn)AS)，表現(xiàn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、先天性心臟發(fā)育不良、特殊面容、生長發(fā)育遲緩等。穩(wěn)定有效的呼吸是機(jī)體生命存活的前提條件?；竟?jié)律性呼吸起源的關(guān)鍵部位為延髓呼吸中樞的面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)(the

2、 medial area of nucleus retrofacialis，mNRF)。中樞性呼吸系統(tǒng)疾病，特別是延髓呼吸中樞的病理性改變已成為臨床工作中的常見病與多發(fā)病，飲酒所引起的子代呼吸中樞功能異常也愈發(fā)多見。因此，研究孕期酒精暴露對子代延髓呼吸中樞功能的作用及其機(jī)制對相關(guān)疾病的預(yù)防和治療有著廣泛的應(yīng)用前景和重要意義。
　　目的:研究5-HT2A受體在孕期酒精暴露抑制新生大鼠延髓腦片基本節(jié)律性呼吸放電活動(dòng)(rhythmic

3、respiratory discharge activity, RRDA)中的作用。
　　方法:1.清潔級Sprague-Dawley成年大鼠，雌雄比例2∶1，雌鼠和雄鼠隨機(jī)分為數(shù)量相等的6組:對照組和1％孕期酒精暴露組、2％孕期酒精暴露組、4％孕期酒精暴露組、8％孕期酒精暴露組、10％孕期酒精暴露組（酒精濃度為v/v），按照雌雄大鼠2∶1合籠交配。對照組大鼠自由飲用純凈水，不同濃度酒精暴露組大鼠自合籠前1W至產(chǎn)后3d以相應(yīng)濃度酒

4、精水溶液作為唯一飲用水（自由飲用）。實(shí)驗(yàn)使用各組2d齡新生大鼠，制作新生大鼠離體延髓腦片，雌雄不拘。使用神經(jīng)電生理技術(shù)記錄并對比各組新生大鼠延髓腦片RRDA，根據(jù)反應(yīng)RRDA指標(biāo)的吸氣時(shí)程(inspiratory time，TI)、呼吸放電積分幅度（integral amplitude，IA）、呼吸頻率（respiratory frequency，RF）變化，明確孕期酒精暴露對新生大鼠RRDA作用的最適酒精濃度。
　　2.為研究5

5、-HT2A受體是否參與孕期酒精暴露對新生大鼠RRDA的作用，實(shí)驗(yàn)分為6組:對照組，孕期酒精暴露組，對照DOI組，孕期酒精暴露DOI組，對照酮舍林組，孕期酒精暴露酮舍林組。
　　3.采用Western Blot技術(shù)檢測孕期酒精暴露對新生大鼠mNRF區(qū)神經(jīng)元5-HT2A受體表達(dá)的影響。
　　4.采用qRT-PCR技術(shù)檢測孕期酒精暴露對新生大鼠mNRF區(qū)神經(jīng)元5-HT2A受體mRNA表達(dá)影響。
　　結(jié)果:1.對照組和1％～8

6、％孕期酒精暴露組延髓腦片RRDA60min內(nèi)穩(wěn)定無衰減，實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头€(wěn)定可靠。與對照組相比，1％孕期酒精暴露組，2％孕期酒精暴露組變化無明顯差異(P＞0.05);隨著酒精濃度的增加，4％～10％孕期酒精暴露組新生大鼠RRDA逐漸減弱，TI縮短、IA減弱、RF下降(P＜0.05)，10％孕期酒精暴露組弱于8％孕期酒精暴露組，但RRDA節(jié)律不規(guī)整，因此，本研究選擇8％酒精作為孕期酒精暴露作用的最適濃度。
　　2.5-HT2A受體特異性激動(dòng)

7、劑DOI對孕期酒精暴露組和對照組腦片放電都有興奮作用，孕期酒精暴露組興奮效果弱于對照組;5-HT2A受體特異性拮抗劑酮舍林對孕期酒精暴露組和對照組腦片放電都有抑制作用，孕期酒精暴露組抑制效果弱于對照組。
　　3.隨著酒精濃度的增加，4％、8％孕期酒精暴露組5-HT2A受體在新生大鼠延髓呼吸中樞mNRF區(qū)神經(jīng)元表達(dá)水平逐漸下調(diào)(P＜0.05)。
　　4.經(jīng)qRT-PCR檢測8％孕期酒精暴露組5-HT2A受體mRNA在新生大鼠延