2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   觀察大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus,SE)后海馬區(qū)腦組織miR-34a的表達分布規(guī)律;通過干預(yù)miR-34a表達水平,探討其在癲癇后海馬神經(jīng)元凋亡中的作用。
   方法:
   1.建立模型:采用6~8周齡健康雄性SD大鼠,隨機分為空白對照組(Normal,N組),癲癇組(Epilepsy,Ep組),干預(yù)組(Antagomir,A組)和干預(yù)對照組(Antagomir-cont

2、rol,C組)。對EP組、A組、C組建立氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠SE模型。在SE誘導(dǎo)成功后4-6小時分別對A組和C組側(cè)腦室立體定向給予Antagomir和Antagomir-control干預(yù)miR-34a表達水平,各組均以在1天(24小時,急性期)、7天(靜止期)作為研究時間點。
   2.對大鼠行腦電圖檢查,記錄生理狀態(tài)、致癇期Ⅳ級以上發(fā)作狀態(tài)、造模成功后發(fā)作間期狀態(tài)、自發(fā)發(fā)作狀態(tài)的腦電變化,確認癲癇模型的建立。
  

3、 3.實時定量-PCR檢測各組miR-34a表達水平,檢測干預(yù)前后miR-34a表達量的變化,以驗證藥物干預(yù)miR-34a的效果。
   4.采用Western Blot和免疫組化技術(shù)檢測caspase-3蛋白在大鼠海馬組織中的分部及其表達量的變化。
   5.TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTPnick-end-labeling)法檢測大鼠

4、SE后海馬區(qū)腦組織神經(jīng)元細胞凋亡情況。
   6.Nissl染色研究大鼠SE后海馬區(qū)腦組織神經(jīng)元細胞缺失及存留情況。
   結(jié)果:
   1.依據(jù)動物行為學(xué)表現(xiàn)及腦電圖結(jié)果,最終造模組(Ep組、A組、C組)大鼠成模率為89.17%。成模及干預(yù)后,大鼠因自身恢復(fù)、麻醉意外、手術(shù)創(chuàng)傷等因素,部分發(fā)生死亡,最終可用實驗組動物的成活率為69.17%。
   2.實時定量PCR檢測顯示,在急性期和靜止期,miR-3

5、4a的表達在Ep組較N組均顯著增高,藥物干預(yù)后A組較C組均顯著降低,有顯著性差異,干預(yù)有效。
   3.Western Blot檢測顯示,在急性期和靜止期,caspase-3蛋白的表達在Ep組較N組均顯著增高,藥物干預(yù)后A組較C組均顯著降低,有顯著性差異,與實時定量PCR結(jié)果趨勢相一致。
   4.免疫組化檢測顯示,在急性期和靜止期,Ep組與藥物干預(yù)對照C組中caspase-3蛋白在海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元胞漿均高

6、表達,而N組和藥物干預(yù)A組均僅有較低密度的表達,與Western Blot結(jié)果相一致。
   5.TUNEL檢測顯示,在急性期和靜止期,Ep組海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元細胞凋亡均明顯多于N組;藥物干預(yù)后A組海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元細胞凋亡均明顯低于C組,與實時定量PCR、WesternBlot、免疫組化結(jié)果相一致。
   6.Nissl染色顯示,在急性期和靜止期,Ep組海馬(CA1、CA3區(qū))神經(jīng)元細胞損失均明

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