NF-κB在海馬神經(jīng)元癲癇中的表達.pdf

1、分類號：R - 7 4 2 ．1密 級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位 ◇學(xué)校代碼：1 006 2學(xué) 號：2 0 1 0 6 0 2 3 6 0學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又肄魯斜袁等碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目：N F ．K B 在海馬神經(jīng)元癲癇模型中的表達T IT L E C h a n g e so f N F —K B e x p r e s s i o n i nh i p p o c

2、 a m p a ln e u r o n s e p i l e p s ym o d e l一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：神經(jīng)病學(xué)論文作者： 羅芳指導(dǎo)教師： 謝炳約 教授導(dǎo)師組成員：宋毅軍 教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要研究目的：1 、顳葉癲癇是一種難治性癲癇，是神經(jīng)科常見的臨床綜合征，其發(fā)病機制尚未完全闡明。目前N F ．1 c B 在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用是神經(jīng)病學(xué)研究的熱點之一，研究發(fā)現(xiàn)N

3、F ．1 出通過介導(dǎo)免疫損傷，可造成腦損害；2 、探討體外海馬神經(jīng)元癲癇的發(fā)病機制；3 、探討無鎂細胞外液誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元放電后N F ．r , B 的表達及活性的研究，并進一步驗證體內(nèi)大鼠癲癇模型中N F ．v , B 表達結(jié)果的可信度，從而為臨床抗癲癇藥物提供一定的理論基礎(chǔ)。實驗方法：以體外原代培養(yǎng)的S p r a g u e D a w l e y 乳鼠( 出生2 4 小時之內(nèi)) 大腦海馬神經(jīng)元作為實驗材料，體外培養(yǎng)7 天后，進行實

4、驗。1 、細胞形態(tài)學(xué)觀察：于倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)，并采集各組細胞形態(tài)的圖像。2 、免疫熒光染色法( M A P 2 ) 對體外培養(yǎng)的神經(jīng)元進行純度鑒定：用M A P 2抗體標記神經(jīng)元，D A P I 染核，在熒光顯微鏡下觀察，并采集圖像。3 、利用膜片鉗技術(shù)檢測神經(jīng)元癇樣放電。4 、W e s t e r n b l o t 方法檢測正常對照組和實驗組N F ．K B 的表達水平。5 、免疫熒光染色法對實驗組和對照組細胞內(nèi)N

5、 F ．v , B 的表達水平和亞細胞定位進行檢測。實驗結(jié)果：1 、細胞形態(tài)學(xué)觀察及神經(jīng)元純度鑒定：正常神經(jīng)元經(jīng)體外培養(yǎng)4 8 小時后大多數(shù)呈紡錘形，部分呈橢圓形或三角形，細胞突起可見，培養(yǎng)第7 天時胞體立體感好，形態(tài)飽滿，突起更豐富，相互交織成網(wǎng)絡(luò)。采用神經(jīng)元特異性抗體微管相關(guān)蛋白2 ( M A P 2 ) 進行免疫熒光染色( 詳見實驗方法2 ) ，熒光倒置顯微鏡采集熒光信號，鑒定結(jié)果顯示：培養(yǎng)第2 天的神經(jīng)元陽性率為5 0 ％～6