健腦益智膠囊對(duì)TBI大鼠腦神經(jīng)元形態(tài)改變及腦組織TNF-α和NF-κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)觀察不同干預(yù)條件下不同組別的顱腦損傷(TBI Traumatic braininjuries)大鼠腦神經(jīng)元形態(tài)和大鼠空間辨別性學(xué)習(xí)記憶能力改變及其對(duì)神經(jīng)元上的核轉(zhuǎn)錄因子NF-κ B(Nuclear transcription factor-Kappa B，NF-κ B)、腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosis factor-α，TNF-α)表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討基于“豁痰化瘀利水”大法的健腦益智膠囊對(duì)TBI大鼠神經(jīng)元形態(tài)

2、改變以及NF-κ B、TNF-α的表達(dá)是否具備干預(yù)效應(yīng)。
　　方法:選取清潔級(jí)健康SD大鼠（2月齡），隨機(jī)編號(hào)后分為4大組，分別為A（假手術(shù)組）、B組（模型組）、C組（健腦益智膠囊組）、D組（腦復(fù)康組）。單組按采集腦組織標(biāo)本的時(shí)序分為例如A1-A4的亞組;各組均采用改良Feeney法[1]造模（假手術(shù)組不予處理），A組:經(jīng)打擊器顱腔使顱腔開放，見(jiàn)硬膜外露后將頭皮縫合，僅給予常規(guī)喂養(yǎng);B組:造模后常規(guī)喂養(yǎng)，不予處理;C組:健腦益智膠

3、囊給藥3次/日，配置規(guī)格:0.75g/ml混懸液，給藥途徑:灌胃，單次給藥劑量:1.5克/千克，;D組:常規(guī)喂養(yǎng)，腦復(fù)康片給藥3次/日，配置規(guī)格:0.09g/ml混懸液，給藥途徑:灌胃，單次灌胃劑量:1.2克/千克，運(yùn)用水迷宮(Morris watermaze)[2]實(shí)驗(yàn)觀察并記錄造模前及造模后給予相應(yīng)干預(yù)的模型大鼠在第1、3、5、7天的空間辨別性學(xué)習(xí)和記憶能力等行為學(xué)變化[2]，并在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)分別在喂養(yǎng)3天、5天、7天后隨機(jī)處死相應(yīng)亞

4、組大鼠，采集腦組織標(biāo)本，立即固定于4％多聚甲醛中24h，梯度酒精脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片（厚度5μ m）5張取1張，HE染色，鏡下觀察攝片，部分用TNF-α和NF-κB免疫組化分析。
　　結(jié)果:本次實(shí)驗(yàn)成功造模，按照神經(jīng)功能(NSS)評(píng)分，所有模型大鼠腦功能均重度缺損?？偣仓滤?0只大鼠，（致死率20.0％）。所有大鼠造模前均腦功能完整，造模后，首日都表現(xiàn)空間辨別性學(xué)習(xí)和記憶能力變差，還表現(xiàn)為對(duì)外界刺激反應(yīng)變慢，萎靡不振等;第3天

5、除B組改善不明顯，其余各組表現(xiàn)均較前改善;5d時(shí)B組差于其它組別，但都表現(xiàn)好轉(zhuǎn);5d時(shí)C、D組空間辨別性學(xué)習(xí)和記憶能力和反應(yīng)有明顯進(jìn)步，優(yōu)于B組與A組。數(shù)據(jù)結(jié)果分析表明:C、D組大鼠TNF-α和NF-κB等陽(yáng)性細(xì)胞檢出率在初期（3天以內(nèi)）明顯不差異（P＞0.05），兩組較B組TNF-α和NF-κB低（P＜0.05），有差異;傷后(5-7天)C組大鼠TNF-α和NF-κ B表達(dá)水平較A、B、D組高，(P＜0.05)有差異，與B組比較TNF

6、-α和NF-κB水平顯著降低（P＜0.05），有顯著差異。HE染色24h-3d可見(jiàn)挫傷灶細(xì)胞周圍見(jiàn)大量液化壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);5-7 d時(shí)見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)伴膠質(zhì)細(xì)胞增生，模型組較其他各組嚴(yán)重;尼氏染色各組損傷灶周圍24h可見(jiàn)出現(xiàn)細(xì)胞水腫、空泡變性，尼氏染色淺且數(shù)目減少模型組較其他各組嚴(yán)重，按照嚴(yán)重程度由高到低:B組＞A組＞D組＞C組;tunel原位檢測(cè)見(jiàn)24h-3d凋亡細(xì)胞數(shù)持續(xù)增多，3d時(shí)最多，7d時(shí)較前下降，按照嚴(yán)重程度由高到低:B組

7、＞A組＞D組＞C組。
　　結(jié)論:1.健腦益智膠囊可以抑制實(shí)驗(yàn)性TBI大鼠腦神經(jīng)元上TNF-α和NF-κB的過(guò)分表達(dá)發(fā)揮干預(yù)神經(jīng)元形態(tài)改變作用，進(jìn)而抑制TNF-α，減輕炎性反應(yīng)及神經(jīng)元凋亡，達(dá)到干預(yù)神經(jīng)元形態(tài)改變的作用;
　　2.根據(jù)相關(guān)研究推測(cè)其的可能機(jī)制包括:a.可抑制損傷灶炎性反應(yīng)，b.通過(guò)干預(yù)NF-κB過(guò)度釋放，抑制TNF-α和NF-κB過(guò)度活化，抑制其瀑布樣反應(yīng)出現(xiàn)，有效保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞。
　　3.智膠健腦益囊可以