癲癇持續(xù)狀態(tài)幼鼠海馬神經(jīng)元凋亡及NGF的干預(yù)作用研究.pdf

1、背景：
　　癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)是臨床科室尤其是小兒神經(jīng)內(nèi)科十分常見的急癥，國際抗癲癇聯(lián)盟的傳統(tǒng)定義一次癲癇持續(xù)30分鐘以上，或反復(fù)多次發(fā)作持續(xù)30分鐘，且發(fā)作間期意識不能恢復(fù)至發(fā)作前基線狀態(tài)。相關(guān)動物實(shí)驗(yàn)證實(shí),SE30分鐘后腦神經(jīng)就開始大量的死亡，而細(xì)胞凋亡是其主要的形式之一，細(xì)胞凋亡在腦神經(jīng)元死亡的過程中扮演著極其重要的作用。
　　1972年Kerr等首次提出了細(xì)胞凋亡的概念，根據(jù)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的不同特征，把細(xì)胞死亡分為

2、壞死和凋亡兩種方式。早期對神經(jīng)細(xì)胞凋亡的研究大多集中在神經(jīng)元的正常發(fā)育過程。大量研究表明，神經(jīng)元的凋亡與顱腦損傷后存活的細(xì)胞數(shù)目有著直接關(guān)系，并對腦損傷后的預(yù)后產(chǎn)生十分重要影響，因而進(jìn)一步認(rèn)識神經(jīng)細(xì)胞的凋亡極具重要性。神經(jīng)細(xì)胞的凋亡的發(fā)生與否主要取決于抗凋亡因素的抑制及凋亡誘導(dǎo)因素的激發(fā)這兩方面的綜合作用。半胱氨酸天冬酶家族（Caspase）的激活與抑制在細(xì)胞的凋亡的三條凋亡通路中都有涉及，該蛋白酶系統(tǒng)位于許多凋亡路徑的交點(diǎn)，導(dǎo)致了凋亡

3、細(xì)胞解體?？沟蛲龅鞍准易逯休^為獨(dú)特的是人類凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosisproteins,IAPs），其中的X-IAP是唯一可與凋亡啟動因子Caspase-9及效應(yīng)因子Caspase-3相結(jié)合的抗凋亡蛋白。亦有證據(jù)表明Caspase-9和Caspase-3的激活、細(xì)胞色素C的釋放參與了腦缺血誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。已有大量文獻(xiàn)報道：神經(jīng)生長因子（Nervegrowthfactor,NGF）對損傷后的神經(jīng)功能恢復(fù)能起到

4、積極促進(jìn)的作用。韓貴和等研究發(fā)現(xiàn)：NGF對正常神經(jīng)細(xì)胞凋亡有抑制作用，能夠增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞的抗損傷能力。但是，針對SE致發(fā)育中腦損傷細(xì)胞凋亡的靶點(diǎn)開發(fā)特異性神經(jīng)保護(hù)藥物是世界眾多神經(jīng)科學(xué)研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)和努力的方向，目前國際國內(nèi)并沒有實(shí)質(zhì)性突破。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)采用對幼鼠腹腔注射氯化鋰、匹羅卡品建立氯化鋰-匹羅卡品癲癇模型，觀察各組實(shí)驗(yàn)幼鼠海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的病理形態(tài)改變及Caspase3、Caspase9和XIAP的表達(dá)

5、的關(guān)系，并研究NGF對其干預(yù)作用，進(jìn)而找到上游的靶點(diǎn)并為臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.將3~4周齡（25日齡）健康雄性SD幼鼠隨機(jī)分為三大組，9個亞組。①正常對照組（normalgroup,NG）；模型組（statusepilepticsgroup,SG）：②SE后4h組,③SE后8h組,④SE后24h組,⑤SE后72h組；NGF組：⑥NGF后4h組,⑦NGF后8h組,⑧NGF后24h組,⑨NGF后72h組。<

6、br>　　2．用TUNEL法檢測不同時間點(diǎn)海馬區(qū)的細(xì)胞凋亡，用SP免疫組化法檢測海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞Caspase3、Caspase9、XIAP的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.正常組偶見TUNEL陽性細(xì)胞，SE組8h后TUNEL陽性細(xì)胞表達(dá)開始明顯增多,在72h達(dá)峰值。NGF組與SE組陽性細(xì)胞數(shù)的變化趨勢基本相同,但其數(shù)量明顯較SE組少。
　　2.正常對照組海馬各區(qū)內(nèi)僅見少量細(xì)胞核或胞漿黃染的陽性細(xì)胞表達(dá)；與對照組相比

7、，SE組表達(dá)顯著增多，隨時間推移而增加，24h時染色深度及陽性細(xì)胞數(shù)目達(dá)高峰,其細(xì)胞排列明顯較正常紊亂，細(xì)胞核固縮、破碎，72h時稍減少。NGF組的Caspase3變化趨勢與SE組基本相同,在相應(yīng)時間點(diǎn)較SE組均顯著減少。Caspase9的表達(dá)及陽性細(xì)胞特點(diǎn)與Caspase3相似，在SE組其表達(dá)趨勢及峰值亦基本一致，NGF組中Caspase9蛋白表達(dá)在24h、72h顯著減少SE組。
　　3.XIAP海馬區(qū)XIAP陽性細(xì)胞為細(xì)胞核或

8、胞漿黃染，對照組偶見陽性細(xì)胞；SE組XIAP陽性細(xì)胞數(shù)目較對照組明顯增多，染色程度較其加重，在4小時表達(dá)開始增多，8小時達(dá)到峰值，之后略減少；NGF組XIAP蛋白表達(dá)的趨勢與SE組一致，但NGF組XIAP蛋白表達(dá)均顯著多于SE組。
　　結(jié)論：
　　1.癲癇持續(xù)狀態(tài)可引起海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，在急性期內(nèi)，隨著時間的延遲，發(fā)生凋亡的細(xì)胞越多，腦損傷越重。
　　2.細(xì)胞凋亡的發(fā)生與caspase3、caspase9的激活有關(guān)