兩個FAP家系APC基因E1～E14突變及p53基因表達分析.pdf

1、目的:家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)是一種常染色體延遲顯性遺傳病,人群中發(fā)病率為1/10000~1/15000。未經治療的患者至40歲左右時,癌變的幾率可達100％。近年來,由于篩查制度和預防性結腸切除術的開展,FAP死于大腸癌的比例在下降,但死于腸外腫瘤的比例卻呈上升趨逝。通過基因診斷降低本病的發(fā)病率、死亡率具有重要意義。在APC基因突變陽性的家族中,患者的子代有50％的發(fā)病

2、風險,有不少報道認為,APC基因突變位點與FAP的臨床表現(xiàn)相關。本文搜集了兩個FAP家系,家系中患者除結直腸腫瘤外,可伴發(fā)子宮內膜癌、卵巢癌等腸外惡性腫瘤。通過兩個家系APC基因E1~E14突變的檢測分析,為FAP的分子遺傳學機制和建立監(jiān)控系統(tǒng)提供理論依據(jù)。腫瘤的發(fā)生是多因素、多步驟的復雜過程,是癌基因的激活與多個抑癌基因失活共同作用的結果。與APC同樣做為抑癌基因的p53基因在結直腸癌中表達的研究,也越來越受到重視,除了對腫瘤的預后提

3、供指導,也可與FAP基因聯(lián)合做為篩查的目標之一。本文同時采用SP免疫組化方法對兩個FAP家系中結直腸癌患者p53基因的表達進行觀察分析,探討其在結直腸癌生長、浸潤、轉移中的作用,為臨床預測腫瘤的轉移潛能和預后提供依據(jù)。
　　材料及方法：1.2006年至2007年2月,我們共發(fā)現(xiàn)2個經臨床確診的FAP家系。2個家系共有成員44人,FAP患者14人。獲知情同意后,我們抽取9例患者和24例表型正常的血緣親屬為實驗組,1例散發(fā)FAP患者和

4、2例隨機健康人作為對照組,兩組均為漢族,性別、年齡相匹配。提取受試者基因組DNA,PCR-SSCP法檢測APC基因第1~14外顯子突變,對可疑異常條帶進行DNA測序分析。2.收集兩個家系FAP患者手術切除結、直腸癌標本20例,絨毛狀腺瘤組織5例,絨毛狀腺瘤伴不典型增生15例,正常對照15例,采用免疫組織化學S-P法,鼠抗人單克隆抗體p53(MAB-0226)與SP試劑盒均為美國Maxin公司產品(購自福州邁新生物技術公司),染色設對照組

5、,以PBS代替一抗作陰性對照,用已知陽性切片做陽性對照。觀察p53的表達水平。
　　結果:1.經系譜分析,2個家系中FAP呈常染色體顯性遺傳,并有遺傳早現(xiàn)。2.PCR-SSCP電泳顯示,DNA條帶未發(fā)現(xiàn)明顯異常。對擴增產物隨機抽樣進行測序分析,并與APC基因標準cDNA序列(GenBank＃NM-000038)進行比對,證實無突變。3.p53基因在FAP患者結、直腸癌中表達強陽性15例;在絨毛狀腺瘤伴不典型增生中表達陽性3例;在絨

6、毛狀腺瘤中表達陽性6例;在正常結、直腸黏膜中均未見表達。經統(tǒng)計學分析,p53在FAP患者腫瘤組織中的表達與正常結直腸黏膜中的表達有顯著性差異。
　　結論:1.本文兩個家系未發(fā)現(xiàn)APC基因E1~E14突變。2.FAP的發(fā)生有更復雜的分子機理,因此,APC基因可能不應該做為FAP的唯一診斷基因。3.FAP患者結直腸腫瘤組織與正常組織p53的表達有顯著性差異,并隨腫瘤的演變過程逐漸增高。該基因對FAP的發(fā)展、演變起促進作用,但可能不是導