鉤吻素子對小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化的作用及其與干擾素調(diào)節(jié)因子8表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、神經(jīng)病理性疼痛與脊髓背角等中樞鎮(zhèn)痛有效區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞的活化密切相關(guān)?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞根據(jù)功能表型分為以促炎功能為主的M1型和以抗炎功能為主的M2型小膠質(zhì)細(xì)胞，M1型小膠質(zhì)細(xì)胞高表達(dá)多種M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6。本課題前期工作表明，鉤吻素子具有顯著的抗神經(jīng)病理性疼痛作用，其作用與其抑制脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞的活化有關(guān)，但鉤吻素子抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化的細(xì)胞分子機(jī)制有待于探索。鑒此，本文分別在高糖和LPS誘

2、導(dǎo)的BV-2細(xì)胞模型上，分析鉤吻素子對BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化的作用及其與上游調(diào)控因子IRF8、NF-κB/p65表達(dá)的關(guān)系，為闡明鉤吻素子抗NP等藥理作用的細(xì)胞分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　目的：在高糖和LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞M1極化模型上，觀察鉤吻素子對M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6以及IRF8等蛋白水平和mRNA水平的影響，明確鉤吻素子對小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化的抑制作用，并探討其作用與其調(diào)節(jié)IR

3、F8等表達(dá)的關(guān)系。
　　方法：⑴高糖誘導(dǎo)BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞M1極化，采用Western blot和QPCR方法觀察鉤吻素子對高糖誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)的影響；⑵LPS誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞M1極化，選用Western blot和QPCR方法觀察鉤吻素子對LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)的影響；⑶采用Wester

4、n blot和QPCR方法，分別觀察鉤吻素子對高糖、LPS刺激BV-2細(xì)胞IRF8和NF-κB/p65表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①建模和給藥條件的選擇：與對照組細(xì)胞存活率相比，50mM高糖或1.0μg/ml LPS作用24 h不影響細(xì)胞存活率；鉤吻素子對BV-2細(xì)胞作用24 h和48 h的IC50值分別為1.203 mM和0.5968 mM，高糖50 mM或LPS1μg/ml與鉤吻素子200μM共同作用24h對細(xì)胞活力無顯著影響，高

5、糖能夠誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞M1極化標(biāo)志物mRNA水平升高，作用呈濃度和時間依賴關(guān)系。②鉤吻素子對高糖誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞M1極化的作用：高糖模型組細(xì)胞M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平和 mRNA水平顯著高于對照組；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和 IL-1β mRNA水平，作用呈濃

6、度依賴關(guān)系。③鉤吻素子對LPS誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞M1極化的作用：LPS模型組細(xì)胞M1極化標(biāo)志物CD68、CD86、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白水平和mRNA水平顯著高于對照組；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平，作用呈濃度依賴關(guān)系；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞CD86、CD68、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平，作用呈濃度依賴關(guān)系。④鉤吻素子對高糖誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞IRF

7、8、NF-κB/p65表達(dá)的影響：高糖模型組細(xì)胞 IRF8蛋白水平和 mRNA水平均顯著升高；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞 IRF8蛋白水平和 mRNA水平。鉤吻素子對高糖引起 NF-κB/p65蛋白水平的升高未有顯著抑制作用。5.鉤吻素子對LPS誘導(dǎo) BV-2細(xì)胞 IRF8、NF-κB/p65表達(dá)的影響：LPS模型組細(xì)胞IRF8蛋白水平和mRNA水平均顯著升高；鉤吻素子可顯著降低模型細(xì)胞IRF8蛋白水平和mRNA水平。鉤吻素子對LPS引