不同孔徑絲素蛋白的體內(nèi)降解與宿主組織反應(yīng)關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大鼠皮下埋植的方法對(duì)不同孔徑絲素蛋白材料的體內(nèi)降解行為進(jìn)行研究，了解不同孔徑絲素蛋白材料在體內(nèi)降解過(guò)程中的組織形態(tài)學(xué)變化以及宿主的分子生物學(xué)改變，以期發(fā)現(xiàn)不同孔徑絲素蛋白支架影響降解速率的可能機(jī)制，為多孔絲素蛋白材料應(yīng)用于臨床奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　材料與方法:
　　1.制備兩種多孔絲素蛋白支架，小孔徑支架(SF-S)平均孔徑為74.35±10.84μ m、平均孔隙率為94.2±0.1％;大孔徑支架(

2、SF-L)平均孔徑為139.23±44.93μm，平均孔隙率為96.6±0.1％。
　　2.選用140～150g S-D大鼠27只，實(shí)驗(yàn)組（共21只）全麻下在其背部脊柱兩側(cè)約1cm處皮膚各作1個(gè)長(zhǎng)約1.5cm的切口，向腹側(cè)潛行分離約3cm，每只大鼠形成2個(gè)皮下囊狀間隙，分別將SF-S、SF-L植入左、右兩個(gè)皮囊，對(duì)照組（共6只）行相同手術(shù)但不植入材料，以4-0可吸收縫線關(guān)閉皮膚切口。
　　3.術(shù)后選取1、4、12周三個(gè)觀測(cè)時(shí)

3、間點(diǎn)，隨機(jī)取材，分別進(jìn)行一般情況及大體觀察、HE染色、Masson染色觀察組織學(xué)表現(xiàn)，Real-timeRT-PCR法檢測(cè)致炎性因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）、免疫調(diào)節(jié)因子(IL-10)致纖維化因子(TGF-β1)、促血管形成因子(VEGF)的mRNA表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.高孔隙率（＞90％時(shí)）的不同孔徑多孔絲素蛋白支架材料體內(nèi)降解速度不同。在觀察期內(nèi)早期大孔徑的降解速度較小孔徑快，但之后出現(xiàn)微孔塌陷、孔徑

4、變小，12周之后的降解有待進(jìn)一步研究。
　　2.絲素支架植入后引起宿主一系列組織形態(tài)學(xué)變化:早期，主要為以淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、新生血管增生，成纖維細(xì)胞增殖形成整齊有序的纖維包囊;晚期，以成纖維細(xì)胞明顯增殖為特征，形成更厚的纖維包囊和成纖維細(xì)胞帶，且大孔徑組成纖維細(xì)胞增殖量更多，周圍組織炎性細(xì)胞減少，僅在材料降解明顯處有局灶性炎性細(xì)胞聚集，血管數(shù)量減少，并趨于成熟。
　　3.多孔絲素支架植入體內(nèi)1周、4周時(shí)，

5、炎性因子、致纖維化因子及促血管形成因子mRNA表達(dá)量均增加，與組織學(xué)觀察到的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增殖、血管明顯新生及材料無(wú)明顯降解的現(xiàn)象相吻合;12周時(shí)兩組各種因子mRNA表達(dá)量均較前有所減少，與材料周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕及血管數(shù)量減少的組織學(xué)表現(xiàn)相吻合。
　　4.12周時(shí)大孔徑組致纖維化因子、炎性因子mRNA表達(dá)量大于小孔徑組，與此時(shí)大孔徑組成纖維細(xì)胞帶寬于小孔徑組、帶內(nèi)降解明顯處炎性細(xì)胞尤其異物巨細(xì)胞局灶性聚集的組織學(xué)表

6、現(xiàn)相吻合。此時(shí)，殘余材料厚度明顯小于小孔徑組，提示成纖維細(xì)胞有可能也參與了材料的降解，并可誘導(dǎo)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)參與局部材料的降解。
　　5.無(wú)論大孔徑組還是小孔徑組，增生的成纖維細(xì)胞隨著材料的降解逐步長(zhǎng)入材料內(nèi)部，而在材料與宿主交界處呈有序排列極性生長(zhǎng)。
　　6.139.23±44.93μm孔徑的絲素蛋白體內(nèi)降解速度與細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IL-10、TGF-β1以及VEGF有一定相關(guān)性，其中以TNF-α、TGF-β