2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩139頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、血吸蟲?。⊿chistosomiasis)是由血吸蟲(Schistosome)感染引起的一種分布廣泛,危害嚴重的人畜共患寄生蟲病.全球有74個國家和地區(qū)流行血吸蟲病,有5-6億人受到威脅,約2億人感染血吸蟲?。斍把x的防治策略主要以化療藥吡喹酮來進行治療,從而減少發(fā)病率.但是吡喹酮又不能避免重復感染,而且近年來曼氏血吸蟲已經(jīng)有吡喹酮抗性蟲株的報道,耐藥蟲株的出現(xiàn)引起了人們的不安與高度關(guān)注.因此,加強抗血吸蟲疫苗的開發(fā)和新藥物靶標的篩

2、選顯得格外重要.
   在我國,日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)可以感染40多種哺乳動物,山羊、黃牛、綿羊、兔子和小鼠等都是其易感宿主,但是另外一些哺乳動物如大鼠等是日本血吸蟲的不易感宿主,在不易感宿主體內(nèi),血吸蟲的發(fā)育率低而且蟲體較?。畺|方田鼠是目前為止唯一一種對日本血吸蟲具有抗性的宿主,日本血吸蟲尾蚴可以感染東方田鼠,感染之后蟲體發(fā)育遲緩,在感染尾蚴15天后,東方田鼠體內(nèi)基本上找不到存活的蟲體,感染4

3、2天后,東方田鼠體內(nèi)檢查不到日本血吸蟲成蟲,不同的宿主能夠為日本血吸蟲提供不同的生存環(huán)境,影響到蟲體的生存和發(fā)育,不同宿主環(huán)境中生長的蟲體在蛋白表達上也會存在差異,而這些差異表達的蛋白可能是蟲體生存發(fā)育所需要的關(guān)鍵分子.因此找到在不同易感性宿主環(huán)境中日本血吸蟲生長發(fā)育差異的蛋白具有重要理論和實際意義.
   1、日本血吸蟲童蟲在不同敏感性宿主體內(nèi)差異表達蛋白的研究
   本文應(yīng)用熒光差異凝膠雙向電泳技術(shù)(2D-DIGE)

4、,對BALB/c小鼠、Wistar大鼠和東方田鼠體內(nèi)的10d日本血吸蟲童蟲的蛋白表達情況進行了分析,通過DoCyder6.5軟件分析和匹配后,得到了1721個點適合進行后續(xù)的差異分析.在大鼠體內(nèi)lOd童蟲蛋白和小鼠體內(nèi)10d童蟲蛋白的比較分析中發(fā)現(xiàn),有39個蛋白點存在顯著性差異,其中有27個蛋白點在小鼠體內(nèi)10d童蟲中高表達,12個蛋白點低表達.在小鼠體內(nèi)10d童蟲蛋白和東方田鼠體內(nèi)10d童蟲蛋白的比較分析中發(fā)現(xiàn),有21個蛋白點存在顯著

5、性差異,其中有13個蛋白點在小鼠體內(nèi)10d童蟲中高表達,8個蛋白點低表達.
   將分析膠與制備膠進行比對挑點,最終共有44個差異表達蛋白能夠進行后續(xù)的質(zhì)譜分析,將質(zhì)譜鑒定出的數(shù)據(jù)進行搜庫比對,其中3個蛋白點沒有注釋信息,其余41個蛋白點經(jīng)過序列比對與去重復分析后發(fā)現(xiàn),共代表了33種蛋白.
   為了驗證2D-DIGE實驗分析的可靠性,我們挑取了其中6個差異表達蛋白進行了實時定量分析,在基因水平上對其結(jié)果進行驗證,驗證結(jié)

6、果顯示,實時定量的結(jié)果與2D-DIGE的結(jié)果基本一致.
   我們對差異表達蛋白進行了GO分類以及KEGG通路分析,結(jié)果顯示,在小鼠體內(nèi)10d童蟲和大鼠體內(nèi)10d童蟲的差異表達蛋白中,40%的差異蛋白在蛋白代謝途徑中,26%的差異蛋白在糖類代謝途徑中,13%的差異蛋白在RNA代謝途徑中,9%的差異蛋白與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān),其余的差異表達蛋白與蛋白轉(zhuǎn)運、調(diào)節(jié)基因表達和細胞骨架蛋白有關(guān)。在小鼠體內(nèi)10d童蟲和東方田鼠體內(nèi)10d童蟲的差異表

7、達蛋白中,53%的差異蛋白在蛋白代謝途徑中,23%的差異蛋白在RNA代謝途徑中,其余的差異表達蛋白與糖類代謝途徑、核酸代謝途徑和細胞骨架蛋白有關(guān)。其中線粒體外膜轉(zhuǎn)移酶復合物TOM34、蛋白酶體亞基、核內(nèi)核糖體異構(gòu)蛋白K和肌動蛋白在易感宿主小鼠體內(nèi)高表達,而半胱氨酸蛋白酶抑制劑、醛縮酶和70kDa熱激蛋白在不易感宿主大鼠體內(nèi)或抗性宿主東方田鼠體內(nèi)高表達.
   本文首次對不同宿主體內(nèi)的日本血吸蟲10d童蟲進行了蛋白質(zhì)組分析,為我們

8、更好的理解血吸蟲的生長發(fā)育機制提供了依據(jù),同時也可為抗血吸蟲疫苗和潛在藥物靶標的研究提供基礎(chǔ).
   2、日本血吸蟲蛋白酶體a5和a2亞基基因的克隆、表達及免疫效果觀察
   本文利用RT-PCR技術(shù)從日本血吸蟲18 d童蟲中首次擴增到蛋白酶體a5亞基基因(GcnBank accession FJ595238).序列分析表明蛋白酶體a5亞基基因的ORF含747bp,編碼248個氨基酸,理論分子量27.38 kDa.同源性

9、分析結(jié)果顯示,該基因分別為日本血吸蟲蛋白酶體a5亞基,命名為SjPSMA5.實時定量PCR對該基因在蟲體不同發(fā)育階段和不同宿主體內(nèi)10d童蟲中的表達情況進行了分析,結(jié)果顯示,該基因在7d、13d、18d、23 d、32 d和42 d蟲體中都有表達,13d和32 d蟲體中的表達量高于其他時期;在小鼠體內(nèi)的lOd童蟲中的表達量要高于大鼠和東方田鼠體內(nèi)的lOd童蟲中的表達量.構(gòu)建了該基因的原核表達質(zhì)粒pET28a(+)-SjPSMA5,在大腸

10、桿菌系統(tǒng)中成功獲得了表達,重組蛋白rSjPSMA5以包涵體形式存在.Western印跡顯示表達的重組蛋白rSjPSMA5能被日本血吸蟲成蟲粗抗原免疫血清所識別,并且能檢測到天然狀態(tài)下該蛋白的存在.免疫組化實驗結(jié)果表明,SjPSMA5蛋白在蟲體各組織器官內(nèi)廣泛分布.應(yīng)用重組蛋白免疫BALB/c小鼠后,產(chǎn)生了較高的特異性抗體水平,并且CD4+細胞數(shù)量顯著升高,誘導了23.29%的減蟲率和35.23%的肝臟減卵率,
   本文利用RT

11、-PCR技術(shù)從日本血吸蟲18 d童蟲中擴增到蛋白酶體0.2亞基基因(GenBank accession AY813725).序列分析表明蛋白酶體a2亞基基因的ORF含708bp,編碼235個氨基酸,理論分子量25.84 kDa.同源性分析結(jié)果顯示,該基因為日本血吸蟲蛋白酶體a2亞基,命名為SjPSMA2。實時定量PCR對該基因在蟲體不同發(fā)育階段和不同宿主體內(nèi)10d童蟲中的表達情況進行了分析,結(jié)果顯示,該基因在7d、13d、18d、23

12、d、32 d和42 d蟲體中都有表達,7d和23d蟲體表達量低于其他幾個時期;在小鼠體內(nèi)的10d童蟲中的表達量要略高于大鼠和東方田鼠體內(nèi)的lOd童蟲中的表達量.構(gòu)建了該基因的原核表達質(zhì)粒pET28a(+)-SjPSMA2,在大腸桿菌系統(tǒng)中成功獲得了表達,重組蛋白rSjPSMA2以包涵體形式存在.Western印跡顯示表達的重組蛋白rSjPSMA2能被日本血吸蟲成蟲粗抗原免疫血清所識別,并且能檢測到天然狀態(tài)下該蛋白的存在.免疫組化實驗結(jié)果

13、表明,SjPSMA2蛋白在蟲體各組織器官內(nèi)廣泛分布,應(yīng)用該重組蛋白免疫BALB/c小鼠后,產(chǎn)生了較高的特異性抗體水平,誘導了12.33%的減蟲率和35.23%的肝臟減卵率.
   綜上所述,SjPSMA5和SjPSMA2都可作為潛在的抗血吸蟲病的疫苗候選分子,SjPSMA5和SjPSMA2基因及表達產(chǎn)物的獲得,為探索蛋白酶體在血吸蟲生長發(fā)育中的作用提供了重要基礎(chǔ).
   3、日本血吸蟲硫氧還蛋白過氧化物酶的特性研究

14、>   根據(jù)GenBank上公布的日本血吸蟲硫氧還蛋白過氧化物酶(thioredoxinperoxidse,TPx)基因的登陸號AY813893,對其序列進行分析,結(jié)果表明,該基因的ORF含681bp,編碼227個氨基酸,理論分子量25.09 kDa.信號肽預(yù)測顯示,該基因的前24個氨基酸為信號肽序列.設(shè)計去除信號肽序列的引物,利用RT-PCR技術(shù)從日本血吸蟲42 d童蟲中擴增到約600bp的產(chǎn)物.測序結(jié)果表明,擴增片斷為日本血吸蟲硫

15、氧還蛋白過氧化物酶去除信號肽后的ORF序列.實時定量PCR對該基因在蟲體不同發(fā)育階段和不同宿主體內(nèi)10d童蟲中的表達情況進行了分析,結(jié)果顯示,該基因在蟲卵、尾蚴、7d、13d、21d、28 d、35 d和42 d蟲體中都有表達,7d、13d和42 d雌蟲中表達量高于其他幾個時期;在大鼠體內(nèi)的10d童蟲中的表達量要高于小鼠和東方田鼠體內(nèi)的10d童蟲中的表達量.構(gòu)建了該基因的原核表達質(zhì)粒pET2Sa(+)-SjTPx,在大腸桿菌系統(tǒng)中成功獲

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論